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利用酵母双杂交系统筛选并鉴定出与MCM4 C末端结构域（MCM4-CTD）相互作用的蛋白

作　者: 李鹏
导　师: 张帨瑄
学　校: 华中科技大学
专　业: 生化与分子生物学
关键词: 微小染色体维持蛋白复合物 MCM4-CTD 酵母双杂交 SNF12 染色体重塑
分类号:
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

DNA复制的严谨性和准确性对于遗传信息的传递有重要的作用，微小染色体维持蛋白复合物（MCM complex）是由六个亚基组成的六聚体，在真核细胞的DNA复制过程中起解旋酶的作用。在DNA损伤（DNA damage）时，复制叉会停止，过度的解旋会产生过多的单链DNA（ssDNA）从而能引起复制叉及整个基因组的不稳定。研究发现，MCM复合物中的一个最保守的亚基MCM4的C末端结构域（MCM4-CTD），其编码基因的大小为648bp，可以调控整个MCM复合物，在停止的复制叉处阻止它过度解旋，防止产生过多的单链DNA，这就预示着在DNA损伤时存在DNA损伤反应过程中相关的MCM4-CTD的重要作用。我们利用酵母双杂交实验，将MCM4-CTD克隆到BD载体上，从酵母的cDNA文库中筛选并鉴定出与之相互作用的蛋白SNF12，它是染色体重塑蛋白复合物（chromatin remodeling complex）SWI/SNF中的一个亚基。由此我们推测出在DNA损伤反应的过程中，染色体的重塑活性也参与到DNA复制的调控中。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 绪论  8-21
  1.1 癌症与 DNA 损伤  8-10
  1.2 细胞周期与 DNA 损伤检验点  10-15
  1.3 染色体重塑  15-17
  1.4 蛋白质的相互作用与酵母双杂交  17-19
  1.5 研究目的、意义  19-21
2 实验仪器、主要试剂、培养基  21-23
  2.1 仪器  21
  2.2 试剂、培养基  21-23
3 材料、实验流程及实验方法  23-33
  3.1 材料  23
  3.2 实验流程图  23-24
  3.3 实验方法  24-33
4 结果与分析  33-41
  4.1 重组质粒的片段和载体的获得  33
  4.2 重组质粒的酶切鉴定  33-34
  4.3 筛选出的阳性结果的鉴定  34-39
  4.4 酵母双杂交验证阳性质粒的相互作用  39-41
5 总结与展望  41-42
致谢  42-43
参考文献  43-48
附录Ⅰ  48-51
  质粒图谱 1  48-49
  质粒图谱 2  49-50
  质粒图谱 3  50-51
附录Ⅱ  51

利用酵母双杂交系统筛选并鉴定出与MCM4 C末端结构域（MCM4-CTD）相互作用的蛋白

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