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应用酵母双杂交法筛选LOH12CR1互作蛋白

作　者: 王迎伟
导　师: 施小六
学　校: 中南大学
专　业: 消化内科
关键词: Peutz-Jegher综合征 STK11/LKB1 LOH12CR1 互作蛋白酵母双杂交
分类号: R596
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

PJ综合征(Peutz-Jeghers Syndrome)是一种常染色体显性遗传病,以口唇,颊部黑斑,胃肠道多发错构瘤样息肉为主要特征,并与胃肠道、胰腺、卵巢等多种良、恶性肿瘤相关。该病被认为是STK11(又名LKB1)基因突变所致,编码一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。目前已明确STK11/LKB1的作用底物,细胞中过表达的STK11/LKB1能使细胞阻滞在G1期,表明STK11/LKB1可能作为抑癌基因发挥功能。目前经研究证实STK11/LKB1主要的生理功能包括：参与维持细胞极性,细胞周期阻滞作用及促进细胞凋亡,调节细胞能量代谢,调节胚胎发育与信号转导,抑制肿瘤细胞增殖。对于STK11/LKB1功能认识在很大程度上是由于其互作蛋白的发现,STK11/LKB1可能通过与蛋白的相互作用而从多个路径参与细胞的生理过程。LOH12CR1为本课题组应用GST Pull down技术和免疫共沉淀实验筛选并验证了STK11/LKB1新的功能未知的互作蛋白,此蛋白位于12号染色体短臂,其所在区域在造血系统恶性肿瘤及卵巢、乳腺、肺等肿瘤中常有杂合子缺失现象。先前的研究证实LOH12CR1在多种组织中广泛表达,人的LOH12CRI与小鼠、线虫以及果蝇的LOH12CRI假想蛋白高度同源,提示其是一个具有重要功能的蛋白,并且该蛋白与鸟嘌呤核苷酸交换因子TRIO的spectrin repeats区域和Mekk4蛋白某区域有一定的同源性。激光共聚焦显微镜下显示LOH12CRI呈粗斑点状散布于胞浆之中,仅少数定位于胞核,并发现过表达的LOH12CRI能够有效抑制细胞生长和增殖的作用,这种作用不依赖于STK11/LKB1内源性的表达。为进一步明确STK11/LKB1与LOH12CR1作用机制上是否具有协同作用,以及二者的互作是否需要辅助蛋白的参与,本研究应用Clontech公司的第四代酵母双杂交系统MatchmakerTM Gold Yeast Two-Hybrid System初步筛查出LOH12CRI的互作蛋白,为进一步深化对STK11/LKB1与LOH12CR互作机制提供基础。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
英文缩略词表  9-10
第一章前言  10-12
第二章材料与方法  12-21
第三章结果  21-29
第四章讨论  29-37
第五章结论  37-38
参考文献  38-42
综述  42-52
  参考文献  48-52
致谢  52

应用酵母双杂交法筛选LOH12CR1互作蛋白

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