耐药性目的了解肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,SP)在苏州地区儿童呼吸道感染中的感染情况;探讨SP感染的流行病学特征;了解本地区SP对抗菌药物尤其是对β-内酰胺类的敏感性。方法选取2006年1" />

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肺炎链球菌在苏州地区儿童急性呼吸道感染中的地位及其耐β-内酰胺类抗菌药物相关基因的研究

作　者: 黄璐
导　师: 季伟
学　校: 苏州大学
专　业: 儿科学
关键词: 呼吸道感染儿童肺炎链球菌 β-内酰胺类抗生素耐药性纸片扩散法最小抑菌浓度青霉素结合蛋白耐药序列分析
分类号: R450
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

第一部分肺炎链球菌儿童急性呼吸道感染的流行病学特征及耐药性的学位论文">耐药性目的了解肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,SP)在苏州地区儿童呼吸道感染中的感染情况;探讨SP感染的流行病学特征;了解本地区SP对抗菌药物尤其是对β-内酰胺类的敏感性。方法选取2006年1月～2008年12月苏州大学附属儿童医院呼吸科4865例急性呼吸道感染住院患儿,采用无菌负压吸引法采集新鲜痰液,分离培养得到SP株的纯培养物。用纸片扩散法(Kirby-Bauer法,K-B法)测定9种抗生素的药物敏感性,对其中79株SP以E-test法测定4种β-内酰胺类抗生素最小抑菌浓度(minimalinhibitory concentrations,MICs)。结果4865例痰标本中,检测到509株SP,阳性率为10.5%。三年间SP检出率无明显差异。SP以3～5岁儿童最为易感,无性别差异,春冬季感染率较高。SP导致的疾病主要为支气管肺炎(86.2%),临床表现主要为咳嗽(96.9%)、发热(60.3%)、喘息(49.3%)、肺部罗音(81.6%)和胸片异常(90.4%)。SP感染患儿易合并鼻-鼻窦炎。单纯SP感染149例,合并感染病原中以支原体和合胞病毒最为多见,分别为28.5%和17.5%。检出的SP株对红霉素、克林霉素、四环素的耐药率均在90%以上,对氯霉素、氧氟沙星、利福平的耐药率较低,未发现对万古霉素耐药株。79株SP中91.1%为中介株,对头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟的耐药率分别为87.3%、32.9%、10.1%。93.7%的SP株存在多重耐药现象,在耐药(R)模式上,以红霉素+复方新诺明+克林霉素+四环素+头孢呋辛最常见(29.1%)。结论(1)肺炎链球菌为苏州地区儿童呼吸道感染中最易感的细菌病原。(2)全年均存在SP感染,流行高峰在春冬季。(3)SP感染的临床特征无特异性,引起的感染主要表现为下呼吸道感染。(4)SP对红霉素、克林霉素、四环素、头孢呋辛的耐药率极高,对青霉素、头孢曲松以中介为主,对头孢噻肟的耐药率相对较低,随着青霉素MIC值的增高,SP对其它抗生素的耐药率亦呈上升趋势。苏州地区SP耐药形势严峻,临床上对SP感染的治疗有待调整。第二部分肺炎链球菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的研究目的分析肺炎链球菌(SP)β-内酰胺类耐药相关基因PBP1a、2b、2x序列的氨基酸变异情况及其与β-内酰胺类抗生素最小抑菌浓度(MIC)的关系。方法选取2008年4月～2008年10月于苏州大学附属儿童医院收集到的各种来源SP标本59株,以E-test法测定4种β-内酰胺类抗生素MIC,对各株SP的青霉素结合蛋白(penicillin binding proteins,PBPs)基因PBPla、2b和2x的青霉素结合区域(penicillin binding domain PBD)以巢式PCR扩增及测序,将其与SP标准株R6序列进行比对,分析氨基酸变异情况。结果59株SP中PSSP株8例(13.5%),PISP株46例(78.0%),PRSP株5例(8.5%)。两株PRSP未检出PBP1a。已证实与耐药相关的活化位点突变在本研究中均有发现,如PBP1a中Thr371→Ala/Ser,PBP2b中Thr451→Ala、Glu481→Gly以及PBP2x中Thr338→Ala。同时本次研究亦发现一些少见的变异位点,如PBP2x中Ser337→Thr、Gln552→Glu(使头孢菌素MIC值增加约3倍),PBP2b中Gly472→Leu、Ser474→Asn、Gly488→Ala及PBP1a中Ser351→Ala、Ile358→Thr。一些位点的氨基酸置换与β-内酰胺类MIC值密切相关,PBP2x中Thr338→Ala、Met339→Phe、Met400→Thr和Arg384→Gly的联合突变株(占45.6%,26/57)头孢菌素类MIC值显著增高,平均MIC≥5.0μg/ml;PBP2b中Ala624→Gly、570QLQPT→AIDTK的联合附加突变(占49.2%,29/59)可使头孢菌素类的平均MIC值升高3倍以上,青霉素MIC平均值达1.0μg/ml:PBP1a氨基酸变异表型较为单一,均为三个保守序列(附近)Thr371→Ala/Ser、Pro432→Thr和574TSQF577→NTGY的同时变异,在此基础上Ser351→Ala、Ile358→Thr的变异可不同程度的增加β-内酰胺类MIC值,达到中介至耐药水平。部分具有相同氨基酸变异的SP株出现不同的β-内酰胺类MIC值。结论(1)PBP1a、2b、2x的氨基酸变异与SP对β-内酰胺类抗生素耐药有关。(2)随着保守序列(附近)氨基酸变异位点的增多,其β-内酰胺类MIC值亦有所增高。(3)临床SP株PBP的氨基酸变异与实验株有一定差异。(4)部分SP株β-内酰胺类MIC值的差异无法完全依赖PBP1a、2b、2x的氨基酸变异来解释,有待对其它PBP或非PBP相关基因的研究。

全文目录

中文摘要  3-6
Abstract  6-10
前言  10-13
第一部分肺炎链球菌儿童急性呼吸道感染的流行病学特征及耐药性的学位论文">耐药性  13-35
  资料与方法  13-17
  结果  17-23
  讨论  23-31
  参考文献  31-35
第二部分肺炎链球菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的研究  35-52
  资料和方法  35-38
  结果  38-43
  讨论  43-49
  参考文献  49-52
附图  52-57
综述  57-70
缩略词表  70-71
攻读学位期间公开发表的论文  71-72
致谢  72-73
详细摘要  73-76

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