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溶藻弧菌耐四种抗生素的蛋白质组学研究

作　者: 郑玉琦
导　师: 简纪常
学　校: 广东海洋大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 蛋白质组学 溶藻弧菌 抗生素 耐药性 双向电泳
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


近十多年来,中国水产品养殖业获得了迅猛发展,于此同时,各种鱼病也不断出现,其危害性也越来越突出,弧菌就是潜在的人类致病菌,其中溶藻弧菌是海水鱼类弧菌病中危害最大的病原菌之一。由于弧菌病的大规模爆发,大量抗生素等化学药物的长期过量使用及滥用,导致弧菌耐药性日益增加,耐药性问题不断困扰着水产养殖业。本实验采用较为先进的2-D SDS-PAGE技术研究了溶藻弧菌在四环素、红霉素、壮观霉素和庆大霉素四种抗生素诱导下差异表达的全菌蛋白图谱,并通过MAIDI-TOF质谱检测了差异表达的蛋白斑点。图谱结果显示,在1/2MIC诱导传代培养作用后,溶藻弧菌全菌蛋白较诱导前存在显著表达差异,经Image Master 2D Platinum图像分析软件比对分析共得到13个差异表达的蛋白斑点,经质谱鉴定结果如下:1.在四环素诱导下,共得到3个差异表达的溶藻弧菌全菌蛋白点,分别是甘油三磷酸周质结合蛋白、磷酸盐ABC转运蛋白或磷酸盐周质结合蛋白以及β-酮硫解酶,前两种蛋白的表达量均为上调,第三种蛋白表达量有所下降。该结果提示溶藻弧菌的耐药机制与周质结合蛋白及转运蛋白有关,并且提示四环素对溶藻弧菌的抑菌作用机制可能是抑制其蛋白合成。2.在红霉素诱导下,共得到3个差异表达的蛋白溶藻弧菌全菌蛋白,分别是磷酸烯醇丙酮酸羧激酶、外膜蛋白N和磷酸丙糖异构酶。这三种蛋白表达量在诱导后均有所下降,提示溶藻弧菌耐药机制与通过外膜蛋白改变其通透性以及溶藻弧菌的能量代谢密切相关3.在壮观霉素诱导下,共得到3个差异表达的溶藻弧菌全菌蛋白。分别是假设蛋白、50S核糖体蛋白和ABC型Fe3+转运系统,这三种蛋白表达量均为上升,提示溶藻弧菌的耐药机制还涉及核糖体蛋白和转运系统。4.在庆大霉素诱导下,共得到4个差异表达的溶藻弧菌全菌蛋白,分别是一种假定蛋白和一种未知蛋白以及葡萄糖类特异性磷酸转移酶系统组分蛋白和组氨酸激酶。除第二种蛋白表达量上升,其他三种均为下降。本文优选了四种不同种类的抗生素即四环素类(四环素)、大环内酯类(红霉素)、氨基糖苷类(壮观霉素和庆大霉素)从不同角度探究溶藻弧菌的耐药机制。从得到的差异表达的蛋白点可知本研究所涉及的耐药机制包括灭活酶或钝化酶的产生,目标靶蛋白的修饰,主动药物转运系统的变化以及细胞外膜的通透性的改变等几种。

全文目录


摘要  6-7Abstract  7-111 前言  11-20  1.1 溶藻弧菌  11  1.2 抗生素与细菌的作用机制  11-13  1.3 四种抗生素的研究与应用现状  13-16    1.3.1 四环素  13-14    1.3.2 红霉素  14-15    1.3.3 壮观霉素  15    1.3.4 庆大霉素  15-16  1.4 新型抗菌药物的研究方向  16  1.5 蛋白质组学及其相关技术研究  16-17  1.6 蛋白质组学的研究方向及应用  17-19  1.7 研究目的及其意义  19-202 溶藻弧菌耐药性菌株的筛选  20-24  2.1 材料与方法  20    2.1.1 菌株  20    2.1.2 主要试剂  20  2.2 药敏试验  20-22  2.3 溶藻弧菌对庆大霉素的MIC 测定  22-23  2.4 耐药菌株的诱导培养  23-243 四环素诱导下溶藻弧菌全菌蛋白的表达  24-30  3.1 材料与试剂  24    3.1.1 菌株  24    3.1.2 主要试剂  24  3.2 溶藻弧菌全菌蛋白的制备  24-25  3.3 双向电泳  25  3.4 图象扫描及图象分析  25  3.5 胶内酶切及MAIDI-TOF 质谱检测  25-26  3.6 数据库分析  26  3.7 蛋白图谱及比对分析结果  26-27  3.8 质谱鉴定结果  27-28  3.9 讨论  28-304 红霉素诱导下溶藻弧菌全菌蛋白的表达  30-35  4.1 材料与方法  30    4.1.1 菌株  30    4.1.2 主要试剂  30  4.2 溶藻弧菌全菌蛋白的制备  30  4.3 双向电泳  30  4.4 图象扫描及分析  30  4.5 胶内酶切及MAIDI-TOF 质谱检测  30  4.6 数据库分析  30-31  4.7 蛋白图谱及比对分析结果  31-32  4.8 质谱鉴定结果  32-33  4.9 讨论  33-355 壮观霉素诱导下溶藻弧菌全菌蛋白的表达  35-39  5.1 材料与方法  35    5.1.1 菌株  35    5.1.2 主要试剂  35  5.2 溶藻弧菌全菌蛋白的制备  35  5.3 双向电泳  35  5.4 图象扫描及图象分析  35  5.5 胶内酶切及MAIDI-TOF 质谱检测  35  5.6 数据库分析  35-36  5.7 蛋白图谱及比对分析结果  36-37  5.8 质谱鉴定结果  37-38  5.9 讨论  38-396 庆大霉素诱导下溶藻弧菌全菌蛋白的表达  39-43  6.1 材料与方法  39    6.1.1 菌株  39    6.1.2 主要试剂  39  6.2 溶藻弧菌全菌蛋白的制备  39  6.3 双向电泳  39  6.4 图象扫描及图象分析  39  6.5 胶内酶切及MAIDI-TOF 质谱检测  39  6.6 数据库分析  39-40  6.7 蛋白图谱及比对分析结果  40-41  6.8 质谱鉴定结果  41-42  6.9 讨论  42-437 结论  43-448 参考文献  44-52致谢  52-53作者简介  53-54导师简介  54

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 鱼病学
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