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61株鸭源鸡杆菌部分耐药基因及其与耐药性关系的研究

作　者: 高冬生
导　师: 王川庆
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鸭源鸡杆菌 耐药性 耐药基因 整合子
分类号: S852.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本试验对临床分离的61株鸭源鸡杆菌进行了耐药性的调查,并在此基础上对部分耐药基因进行了研究,同时分析了耐药基因同耐药性之间的关系。对61株鸭源鸡杆菌利用K-B法进行了14种常见抗生素的药敏试验,结果发现这些菌株总体上对环丙沙星、克林霉素、青霉素、诺氟沙星、卡那霉素、链霉素的耐药性很高,耐药率分别为83.61%(51/61)、93.44%(57/61)、86.89%(53/61)、93.44%(57/61)、80.33%(49/61)、88.52%(54/61);所有受试菌株对庆大霉素、妥布霉素、头孢曲松、头孢吡肟、利福平高度敏感,敏感菌株分别达到了78.69%(48/61)、55.74%(34/61)、70.49%(43/61)、80.33%(49/61)、60.66%(37/61)。多重耐药现象很严重,同时耐受七、八、九、十种抗生素的菌株数目最多,占总菌株数的73.77%(45/61),耐受十一种以上抗生素的菌株数目占8.2%(5/61),其中还出现了一株对所试14种抗生素全部耐药的菌株。对61株鸭源鸡杆菌利用PCR方法进行了卡那霉素相关耐药基因aphA、aadB、aac(6’)-Ih、aac(3)-Ia、aac(3)-Ⅱa的检测,结果只有aphA、aadB、aac(3)-Ⅱa基因检测出阳性,检出率分别为77.05%(47/61)、31.15%(19/61)和14.75%(9/61),aphA基因的检出率要远高于另外两种基因,分析这些基因同卡那霉素的耐药表型后发现,在49株卡那霉素耐药菌株中,具有aphA、aadB、aac(3)-Ⅱa基因的菌株分别占89.80%(44/49)、36.73%(18/49)、18.37%(9/49),因此可以判断,在鸭源鸡杆菌中,卡那霉素抗性主要由aphA基因决定。对61株鸭源鸡杆菌利用PCR方法进行了三类经典整合酶基因的检测,结果从61株鸭源鸡杆菌中检测到intI1阳性菌株19株,占总菌株数的31.15%,intI2和intI3未被检测到,说明Ⅰ类整合子在鸭源鸡杆菌中的存在率较高;对检测到的intI1基因进行测序后在NCBI的Blastn中进行同源性比较,发现同多数细菌intI1基因的同源性均为100%,其中包括大肠杆菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌等,说明鸭源鸡杆菌中的intI1基因也是经典的Ⅰ类整合酶基因,其功能并未发生变化;对intI1基因进行了初步定位,确定了其在鸭源鸡杆菌的质粒上肯定存在;将61株鸭源鸡杆菌分为intI1阳性和阴性组,并利用统计学方法对其同耐药性之间的关系做了分析,结果显示:除头孢曲松、头孢吡肟、利福平外,其余的11种药物在Ⅰ类整合酶阳性组的耐药率要高于阴性组,具有统计学意义,证明鸭源鸡杆菌对抗生素的耐药性同Ⅰ类整合子的存在有关,即具有整合子的菌株易产生耐药性,且更易产生多重耐药性,Ⅰ类整合酶阳性组的耐药性基本上都在8种以上,而阴性组多数都在5种以下。对19株intI1阳性的菌株进行了整合子可变区的检测及分析,结果有18株细菌检测到可变区的存在,1株检测阴性。共检测到5种不同的耐药基因盒,大小分别为3000多bp、1821bp、1600bp、1007bp、744bp,除3000多bp基因盒未测序成功外,其他四种包含的耐药基因组合分别为aadB-PSE-1、aadB-aadA1、aadA2、aadB,这些基因介导细菌对卡那霉素、β-内酰胺类抗生素、链霉素、壮观霉素的抗性。

全文目录


致谢  5-8摘要  8-11文献综述  11-21  1 鸡杆菌概述  11-13    1.1 鸡杆菌分类地位的确立  11-12    1.2 鸡杆菌的微生物学特性  12    1.3 鸡杆菌的致病性  12-13  2 鸡杆菌相关耐药性及耐药基因的研究进展  13-14  3 氨基糖苷类抗生素耐药基因的研究进展  14-16    3.1 氨基糖苷类抗生素概述  14    3.2 常见氨基糖苷类钝化酶  14-15    3.3 临床关于氨基糖苷类耐药基因与耐药性关系的研究  15-16  4 整合子基因盒系统与细菌多重耐药的研究进展  16-21    4.1 整合子基因盒系统的结构  17    4.2 整合子基因盒系统的分类及分布  17-19    4.3 整合子对基因盒的捕获和表达  19    4.4 整合子基因盒系统与细菌多重耐药的关系  19-21试验一 61 株鸭源鸡杆菌对部分抗生素耐药性的检测  21-30  1 材料与方法  21-23    1.1 材料  21-22    1.2 方法  22-23  2 结果  23-28  3 讨论  28-30试验二 61 株鸭源鸡杆菌分离株卡那霉素相关耐药基因的检测及分析  30-36  1 材料与方法  30-31    1.1 材料  30    1.2 方法  30-31  2 结果  31-33    2.1 卡那霉素相关耐药基因的检测  31-33    2.2 卡那霉素相关耐药基因与耐药性的关系  33  3 讨论  33-36试验三 61 株鸭源鸡杆菌三种类型整合酶基因的检测及定位  36-43  1 材料与方法  36-38    1.1 材料  36    1.2 方法  36-38  2 结果  38-41    2.1 intI1 基因的 PCR 检测  38    2.2 intI2、intI3 基因的 PCR 检测  38    2.3 intI1 基因检测结果阳性的鸭源鸡杆菌质粒的提取  38-39    2.4 intI1 基因的定位  39-40    2.5 Ⅰ类整合酶同耐药性的关系  40-41  3 讨论  41-43试验四 鸭源鸡杆菌I 类整合子耐药基因盒的检测及其与多重耐药性关系的研究  43-51  1 材料与方法  43-44    1.1 材料  43    1.2 方法  43-44  2 结果  44-49    2.1 I 类整合子可变区基因的PCR  44-45    2.2 I 类整合子可变区的序列分析  45-47    2.3 I 类整合子可变区PCR 产物的RFLP 分析  47-49  3 讨论  49-51参考文献  51-59Abstract  59-60

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 病原细菌
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