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肺癌单克隆抗体筛选鉴定及临床验证

作　者: 刘德森
导　师: 李力
学　校: 广西医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 肺癌 单克隆抗体 免疫组化 RyR1mRNA 实时荧光定量PCR RyR1 非小细胞肺癌 AQP1 MMP-9 Ki67
分类号: R734.2
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


[研究背景]肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率均居所有肿瘤的首位。目前肺癌的早期筛查、诊断尚缺乏可行、有效的技术方法,因而到医院就诊的肺癌病人多属于中晚期病人。尽管手术、联合化疗及放疗在肺癌的治疗中起到了一定的积极的作用,但肺癌的手术及放化疗治疗复发率高、易出现耐药,因而这些中晚期病人的5年生存率仅为20%～30%。肺癌的早诊困难和中晚期病人常规治疗疗效差是造成肺癌死亡率高的最主要的两个原因,降低肺癌的死亡率,关键在于能从未见临床症状的“健康”人群中筛查诊断早期肺癌,以及采用新的治疗方法、药物进一步提高中晚期肺癌患者的5年生存率。目前,国内外已开展了大量的针对肺癌治疗的研究,从目前已有的临床资料来看,抗体类治疗剂的疗效较为显著,例如ImClone公司开发的中和EGF的抗体IMC-C225、Genentech公司开发的中和VEGF的抗体Avastin、以及TheraCIM h-R3公司的Mab against EGFr labeled with rhenium-188均显示出良好的疗效和应用前景。目前正在试用的抗肺癌抗体药物乃至整个治疗药物的疗效在临床上仍不能令人满意,需要研发新一代的抗体药物进一步提高治疗肺癌的疗效。本研究利用固定化人肺癌细胞可以诱导小鼠产生功能性抗肺癌抗体,在融合后采用甲基纤维素胶的方法一步实现亚克隆化,并结合组织芯片检测实现高通量的筛选和初步鉴定,以获得具有较强的肺癌特异性单抗。本实验采用荧光定量PCR的方法对RyRl基因进行研究,以探讨RyRl基因与肺癌的关系。兰尼碱受体1(ryanodine receptor1, RyR1)是一种由RyRl基因转录翻译而来的高分子量四聚体钙离子通道蛋白,一种受多种生理因素和药物制剂调节的变构蛋白,在脊椎动物中发现有3个亚(RyR1-3)。各RyR亚型表现出不同钙敏感性,并有组织分布特异性：RyRl型主要在骨骼肌,分布于肌细胞的终末池肌浆网膜上,在钙离子信号的产生及肌细胞兴奋收缩中起关键性的作用；RyR2型分布在心脏；RyR3型分布在大脑和神经组织。兰尼碱受体1受激动剂和抑制剂的调节从而引起钙离子浓度的改变,进而引发钙离子信号,这种信号的改变在肌细胞中的作用是使骨骼肌功能障碍。钙离子信号的改变在非兴奋性细胞中可引起细胞分化、增殖与凋亡的相应改变。研究报道提示RyRl基因与多种肿瘤细胞的增值凋亡有关。而RyRl基因在肺癌方面研究较少,本实验希望为肺癌的早期诊断提供新思路。水通道蛋白(aquaporins, AQPs)是一组具有高度选择性的水通道特异蛋白质家族,广泛分布于各种组织的细胞膜蛋白,主要参与液体转运和腺体分泌。AQP1作为最先发现并被鉴定的水通道蛋白,除了发现分布于气道和肺的毛细血管内皮细胞及胸膜,还在心肌细胞、毛细血管、淋巴管内皮细胞、红细胞、脑脉络丛上皮细胞等均有AQP1表达。已有研究证实AQPl在不同来源的肿瘤上有表达,尤其是有侵袭性的肿瘤。基质金属蛋白-9(matrix metalloproteinases-9, MMP-9)是一类细胞外蛋白水解酶,可降解细胞外基质(extracellular matrix, ECM)各种成分,促进肿瘤细胞对周围正常组织的侵袭,有利于肿瘤的扩散和转移。目前,已在多种肿瘤中发现MMP-9的表达体内外研究表MMP-9在肿瘤发生、发展的多个阶段均有作用,影响肿瘤的起始、生长、血管生成、进入血管、离开血管和转移。Ki67是一种与增殖细胞相关的核抗原,是检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标之一。大量研究表明在多种实体恶性肿瘤中Ki67的表达远高于正常组织,Ki67与恶性肿瘤的发展,转移及预后有关。Ki67标记指数可作为判断预后的重要指。研究发现肺癌组织中Ki67指数显著高于肺良性病变组织,而癌旁组织与良性病变组织相比差别无统计学意；肺癌组织中Ki67表达水平增强与肺癌组织学类型、细胞分化程度有关,而与患者PTNM分期、淋巴结转移程度、吸烟与否以及患者的性别、年龄无明显关系；Ki67高表达组肺癌患者的术后生存时间显著低予低表达组。因此,Ki67能较好地反映肺癌细胞的增殖状态,有助于NSCLC的临床诊断和预后判断。有关肺癌与水通道蛋白AQP1关系间的研究已成为新的热点,而AQP1和MMP-9、Ki67在NSCLC中表达相关性方面的研究则未见报道。本研究采用免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌组织中AQP1和MMP-9、Ki67的表达。分析AQP1表达与临床病理特征以及与MMP-9、Ki67表达的关系,以明确水通道蛋白是否在NSCLC组织表达,在病情进展、侵袭转移中是否起重要作用,为今后研究治疗非小细胞肺癌药物提供一种新思路。[目的]获得对于人肺癌细胞具有抑制增殖功能或抗肺癌细胞的功能性抗体,同时有望获得仅识别人肺癌细胞膜表面表位的、可用于免疫导向治疗的特异性肺癌抗体。[方法]利用固定化人肺癌细胞可以诱导小鼠产生功能性抗肺癌抗体,在融合后采用甲基纤维素胶的方法一步实现亚克隆化,并结合组织芯片检测,实现高通量的筛选和初步鉴定[结果]1.用人肺癌固定化细胞免疫BALB/c小鼠,经24次加强免疫后,采用细胞免疫化学检测人肺癌细胞滴片,其血清滴度可达1：70000。2.采用甲基纤维素胶一步获得单克隆杂交瘤细胞。3.杂交瘤的第1轮筛选共筛选出339株杂交瘤,用组织芯片检测了第2轮筛选获得的114株杂交瘤的上清对6种癌组织及相应正常组织的识别情况。挑选对肺癌组织阳性率高而对肺正常组织阳性率低的杂交瘤克隆。最终筛选出23株杂交瘤,选取3株肺癌组织阳性率高而对肺正常组织阳性率最低的杂交瘤,对其分泌的单克隆抗体采用免疫组织化学方法检测,初步鉴定其所识别的抗原与肺癌的相关性。[结论]采用固定化细胞免疫技术,筛选获得了23株较特异识别人肺癌的单克隆抗体。这不仅为临床诊断肺癌提供了有用的工具,而且也为从中筛选功能性抗肺癌单克隆抗体作为治疗药物奠定了重要的基础。初步鉴定了3株单抗的组织特异性,结果表明这3株单抗能特异识别人肺癌组织,但极少与人其他正常组织反应,具有重要的、潜在的临床治疗、诊断应用价值。[目的]探讨RyRl基因与肺癌的关系,RyR1mRNA表达水平与肺癌患者的性别、年龄、病理类型、临床分期、淋巴结转移以及预后的关系。[方法]实验采用荧光定量PCR的方法对113例非小细胞肺癌、55例肺癌旁正常组织和30例肺良性肿瘤组织中RyR1mRNA表达水平进行检测。采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析：两样本均数比较用t检验,多样本均数的两两比较用LSD-t检验；Kaplan-Meier法绘制生存曲线及生存时间的比较；COX比例风险回归模型对RyR1mRNA影响肺癌预后进行多因素分析。[结果]1.肺癌组织RyR1mRNA表达为0.2599±0.0562；肺良性肿瘤组织为0.2070±0.0455；癌旁组织为0.2242±0.0511。三组均数的统计分析比较差异有统计学意义(F=15.915,P=0.000)。肺癌组织与肺良性肿瘤组织比较,P=0.000；肺癌组织与癌旁正常组织比较,P=0.000；良性肿瘤组织与癌旁正常组织比较,P=0.155。即肺癌组织的RyR1mRNA表达水平高于肺良性肿瘤组织和肺癌旁正常组织,肺良性肿瘤组织与癌旁正常组织的差异无统计学意义。2. RyR1mRNA在不同分期癌组织中的RyR1mRNA表达差异有统计学意义(F=3.003,P=0.034)。Ⅰ期肺癌RyR1mRNA表达水平(0.248±0.052)与Ⅱ期肺癌(0.268±0.056)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Ⅰ期肺癌RyR1mRNA表达水平(0.248±0.052)与Ⅲa期肺癌(0.260±0.056)比较差异有统计学意义(P＜0.05)；Ⅱ期肺癌(0.268±0.056)和Ⅲ a期(0.260±0.056)RyR1mRNA表达的水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。RyR1mRNA的表达水平与性别、年龄、病理类型和淋巴结转移均无相关关系,P值均大于0.05。3. Kaplan-Meier分析,得出RyRl基因阳性患者的中位生存时间为21.9个月,阴性为39.3月,差别有统计学意义(P＜10.05)。4.COX模型分析显示RyR1mRNA表达水平为肺癌患者预后独立影响因素(回归系数为0.992,P=0.001)。临床分期和淋巴结转移也是影响肺癌患者预后的独立影响因素,它们的回归系数分别为1.018(P=0.000)和1.370(P=0.008)。[结论]1.肺癌组织的RyR1mRNA表达水平高于肺良性肿瘤组织和肺癌旁正常组织,肺良性肿瘤组织与肺癌旁正常组织的差异无统计学意义。2.Ⅰ期肺癌组织RyR1mRNA表达水平低于Ⅱ和Ⅲa期,而Ⅱ期和Ⅲa期之间差异均无统计学意义。在肺癌早期RyR1mRNA表达水平较低。3. RyR1mRNA表达水平与性别、年龄、病理类型和淋巴结转移无关。4.RyR1表达阳性的患者的中位生存时间为21.9个月,阴性的中位生存时间为39.3.月,即RyRl表达阴性的患者的生存时间比阳性者长。5. RyR1mRNA表达水平、临床分期、淋巴结转移为影响肺癌患者生存时间的独立影响因素。[目的]探讨RyRl蛋白与肺癌的关系,RyRl蛋白阳性表达与肺癌患者的性别、年龄、病理类型、临床分期、淋巴结转移以及预后的关系。[方法]用免疫组化的方法对49例非小细胞肺癌组织、22例肺良性肿瘤组织和31例肺癌旁正常组织RyRl蛋白的表达情况进行检测。采用SPSS13.0统计软件对数据进行统计学分析：计数资料的比较采用x2检验;用Kaplan-Meier法绘制生存曲线及生存时间的比较；用COX比例风险回归模型将有关影响肺癌预后的因素进行多因素分析。[结果]1.肺癌组织RyRl蛋白表达阳性率为71.4%,肺良性肿瘤组织、肺癌旁正常组织RyRl蛋白表达阳性率分别为95.5%和93.5%,肺癌组织与肺良性肿瘤组织RyRl蛋白表达阳性率比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。肺癌组织和肺癌旁正常组织RyRl蛋白表达阳性率比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而肺良性肿瘤、肺癌旁正常组织间RyRl蛋白表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)。2.RyRl蛋白阳性表达肺癌患者不同年龄组RyR1蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)；肺癌RyR1蛋白阳性表达率在组织学类型和临床分期上差异无统计学意义(P＞0.05)；但RyR1蛋白阳性表达率在有淋巴结转移上的差异则有统计学意义(P＜0.05),RyR1蛋白阳性表达率越高淋巴结转移率越低。3.从Kaplan-Meier生存曲线可见,RyR1蛋白阳性表达患者累积生存率与RyR1蛋白阴性表达患者累积生存率比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。RyR1蛋白阳性表达患者平均中位生存期为29个月RyR1蛋白阴性表达患者平均中位生存期为16个月。4.将临床分期、病理类型、年龄、淋巴结转移与否、年龄、性别以及RyRl蛋白阳性表达与肺癌预后的关系进行了多因素分析,COX比例风险回归模型分析显示RyR1蛋白阳性表达不是肺癌患者预后的影响因素(回归系数为-0.0030,P=0.995)。临床分期和淋巴结转移是影响肺癌患者预后的独立影响因素,他们的回归系数分别为1.142(P=0.002)和1.170(P=0.006)。除此之外,其他因素均不是影响肺癌患者预后的独立因素(P＞0.05)。[结论]1.肺癌组织RyR1蛋白阳性表达率高于肺良性肿瘤组织和肺癌旁正常组织。2.肺癌患者中RyR1蛋白阳性表达率在年龄、组织学类型、临床分期等差异无统计学意义。RyR1蛋白阳性表达率在有淋巴结转移上差异则有统计学意义,RyR1蛋白阳性表达率越高淋巴结转移率越低。3.RyR1蛋白阳性表达患者平均中位生存期为29个月,RyR1蛋白阴性表达患者平均中位生存期为16个月。蛋白阳性表达患者较阴性者时间长。4.COX比例风险回归模型分析显示RyRl蛋白阳性表达不是肺癌患者预后的影响因素。临床分期和淋巴结转移是影响肺癌患者预后的独立影响因素。[目的]探讨水通道蛋白-1(AQP1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达和意义,以及与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞核增殖相关抗原(Ki67)表达的关系。[方法]采用免疫组织化学方法检测50例非小细胞肺癌组织中AQPl和MMP-9、Ki67的表达,同时选择30例癌旁正常肺组织、30例肺良性肿物作对照。分析AQPl表达与临床病理特征以及与MMP-9、Ki67表达的相关性。[结果]1.AQP1蛋白在NSCLC、癌旁正常肺组织、良性肿物中的阳性率分别为32.00%、6.67%和20.00%,差异有显著统计学意义(P＜0.05)。2.AQP1蛋白在NSCLC中的表达与性别、年龄、临床分期、肿瘤T分期无关(P＞0.05),与病理类型、分化程度、是否有淋巴结转移及是否有复发转移有关(P＜0.05)。3.AQP1和MMP-9在NSCLC中的表达有相关性(Rs=O.306,P=0.030)：AQP1与Ki67在NSCLC中的表达亦相关(Rs=0.359,P=0.011)。[结论]1.在NSCLC中,AQP1的表达水平明显高于癌旁正常肺组织,但与肺良性肿物间无差异。2.AQP1在NSCLC中的表达与病理类型、分化程度和是否淋巴结转移及复发密切相关,而与性别、年龄、临床分期、T分期无关,提示AQP1在NSCLC的侵袭转移中可能具有重要的作用。3.AQP1和MMP-9的表达正相关,提示AQP1和MMP-9在NSCLC中的侵袭、转移过程中可能有相互促进的作用；AQP1和Ki67的表达正相关,提示AQP1和Ki67在NSCLC中的增殖过程中可能有相互促进的作用。4.联合检测AQP1、MMP-9及Ki67可作为判定非小细胞肺癌恶性程度,评估其侵袭性及转移性的重要指标。5.AQP1蛋白阳性表达患者累积生存率与AQP1蛋白阴性表达患者累积生存率比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。AQP1蛋白阳性表达患者和阴性表达患者平均中位生存时间分别为18.2和31.9个月。COX比例风险回归模型分析显示AQP1蛋白阳性表达是肺癌患者预后的影响因素(P＜0.05)。临床分期和淋巴结转移是影响肺癌患者预后的独立影响因素。除此之外,其他因素均不是影响肺癌患者预后的独立因素(P＞0.05)。

全文目录


致谢  3-11
中文摘要  11-24
ABSTRACT  24-40
第一章 文献综述  40-85
  参考文献  70-85
第二章 功能性抗肺癌单克隆抗体的制备及初步鉴定  85-115
  1.前言  85-88
  2.材料与方法  88-97
    2.1 实验材料  88-90
      2.1.1 标本  88
      2.1.2 细胞系  88
      2.1.3 实验动物  88
      2.1.4 实验试剂及用品  88-89
      2.1.5 主要实验仪器  89-90
    2.2 实验方法  90-97
      2.2.1 细胞培养  90
      2.2.2 免疫用人肺癌固定化细胞悬液的制备  90
      2.2.3 小鼠的免疫  90-91
      2.2.4 细胞融合  91-94
        2.2.4.1 甲基纤维素胶的制备  91
        2.2.4.2 融合用免疫脾细胞悬液的制备  91-92
        2.2.4.3 融合用骨髓瘤细胞的准备  92
        2.2.4.4 融合  92-93
        2.2.4.5 胸腺饲养细胞的制备  93-94
        2.2.4.6 融合后杂交瘤细胞的培养  94
      2.2.5 人肺癌细胞滴片的制备  94-95
      2.2.6 杂交瘤的第1轮筛选  95-96
      2.2.7 杂交瘤的第2轮筛选  96
      2.2.8 杂交瘤的第3轮筛选  96-97
      2.2.9 杂交瘤的初步鉴定  97
      2.2.10 设置及结果判断标准  97
  3.结果  97-104
    3.1 小鼠的免疫  97-98
    3.2 采用甲基纤维素胶一步获得单克隆杂交瘤细胞  98
    3.3 杂交瘤的筛选  98-102
      3.3.1 杂交瘤的第1轮筛选  98-99
      3.3.2 杂交瘤的第2轮筛选  99-100
      3.3.3 杂交瘤的第3轮筛选  100-102
    3.4 部分单克隆抗体的初步鉴定  102-104
  4.讨论  104-112
  参考文献  112-115
第三章 兰尼碱受体1(RyR1)基因在肺癌组织中的表达水平及意义  115-144
  1.前言  115
  2.材料及方法  115-130
    2.1 材料  115-120
      2.1.1 组织资料  116
        2.1.1.1 标本来源  116
        2.1.1.2 诊断分期标准  116
        2.1.1.3 随访  116
      2.1.2 主要试剂和仪器  116-119
        2.1.2.1 主要试剂  117
        2.1.2.2 试剂的配制  117-119
        2.1.2.3 主要仪器与耗材  119
      2.1.3 用具与耗材的处理  119-120
    2.2 实验方法与操作步骤  120-130
      2.2.1 总RNA提取  120-121
        2.2.1.1 实验原理  120
        2.2.1.2 实验步骤  120-121
      2.2.2 RNA逆转录成合成cDNA  121-122
      2.2.3 标准品的构建  122-123
        2.2.3.1 引物设计  122
        2.2.3.2 扩增RYR1基因特异性片及内参片段  122-123
      2.2.4 PCR产物的纯化回收  123-124
        2.2.4.1 实验原理  123
        2.2.4.2 实验方法与步骤  123-124
      2.2.5 DNA产物与TA载体的连接  124-126
        2.2.5.1 实验原理  124-125
        2.2.5.2 实验方法与步骤  125-126
      2.2.6 转化摇菌  126-127
        2.2.6.1 实验原理  126
        2.2.6.2 实验步骤  126-127
      2.2.7 质粒DNA小提  127-128
        2.2.7.1 实验原理  127
        2.2.7.2 实验步骤  127-128
        2.2.7.3 质量鉴定  128
      2.2.8 标准品的配制  128
      2.2.9 实时荧光定量PCR  128-130
        2.2.9.1 实验原理  128-129
        2.2.9.2 实验方法  129-130
      2.2.10 统计软件和分析方法  130
  3.结果  130-139
    3.1 GAPDH和RYR1基因片段的电泳图  130-132
    3.2 构建重组GAPDH/pMD18-T和RYR1/pMD18-T质粒并测序鉴定  132-133
    3.3 RyR1/pMD-18T和GAPDH/pMD-18T质粒的标准曲线的建立  133
    3.4 熔解曲线  133-134
    3.5 RyRl基因在不同组织中表达情况  134-135
    3.6 肺癌组织中RyR1mRNA表达水平与临床病理因素的关系  135-137
      3.6.1 肺癌组织中RyR1mRNA表达水平与临床分期的关系  135
      3.6.2 肺癌组织中RyR1mRNA表达水平与性别的关系  135
      3.6.3 肺癌组织中RyR1mRNA表达水平与年龄的关系  135-136
      3.6.4 肺癌组织中RyR1mRNA表达水平与病理类型的关系  136
      3.6.5 肺癌组织中RyR1mRNA表达水平与淋巴结转移的关系  136-137
    3.7 RyR1mRNA表达水平与预后的关系  137-139
      3.7.1 RyR1mRNA表达水平与生存时间的关系  137-138
      3.7.2 COX归模型分析RyR1mRNA表达水平与预后的关系  138-139
  4.讨论  139-142
    4.1 RyR1mRNA表达水平与肺癌的关系  139-140
    4.2 RyR1mRNA表达水平与肺癌患者预后的关系  140-142
  参考文献  142-144
第四章 RyR1蛋白在肺癌组织的表达及其临床意义  144-163
  1.前言  144
  2.材料及方法  144-154
    2.1 材料  144-148
      2.1.1 组织资料  144-145
        2.1.1.1 标本来源  144-145
        2.1.1.2 诊断分期标准  145
        2.1.1.3 随访  145
      2.1.2 主要试剂和仪器  145-148
        2.1.2.1 主要试剂  145-146
        2.1.2.2 试剂的配制  146-147
        2.1.2.3 主要仪器与耗材  147-148
    2.2 实验方法与操作步骤  148-154
      2.2.1 组织蜡块包埋  148
      2.2.2 酶免疫组化原理及步骤  148-153
        2.2.2.1 酶免疫组化各关键步骤及其原理  148-152
        2.2.2.2 实验步骤  152-153
      2.2.3 结果判定及评定标准  153-154
      2.2.4 统计软件和分析方法  154
  3.结果  154-184
    3.1 肺癌、肺良性肿瘤、肺癌旁正常组织RyR1蛋白表达情况  154-155
    3.2 肺癌RyR1蛋白阳性表达率与患者的年龄的关系  155
    3.3 肺癌RyR1蛋白阳性表达率与临床病理特征的关系  155-156
    3.4 RyR1蛋白阳性表达与预后的关系  156-158
      3.4.1 肺癌RyR1蛋白阳性表达与生存时间的关系  156-157
      3.4.2 COX模型分析肺癌RyR1蛋白阳性与预后的关系  157-158
    3.5 图片采集  158-184
  4.讨论  184-162
    4.1 RyR1蛋白阳性表达水平与肺癌的关系  158-160
    4.2 肺癌组织中RyR1蛋白阳性表达率与临床病理特征的关系  160
    4.3 RyR1蛋白阳性表达与肺癌患者预后的关系  160-162
  参考文献  162-163
第五章 AQP1在非小细胞肺癌中的表达及其与MMP-9、Ki67表达的关系  163-193
  1.前言  163-165
  2.材料与方法  165-169
    2.1 材料  165-167
      2.1.1 研究对象和标本采集  165
      2.1.2 临床及病理资料  165-166
      2.1.3 主要试剂  166
      2.1.4 主要仪器设备  166-167
    2.2 实验方法及步骤  167-168
      2.2.1 标本及切片处理  167
      2.2.2 HE染色  167-168
      2.2.3 免疫组化染色步骤(SP二步法)  168
    2.3 对照组设置  168
    2.4 结果判定标准  168-169
    2.5 统计学处理  169
  3.结果  169-176
    3.1 AQP1、MMP-9和Ki67免疫组化在标本定位情况  169-170
    3.2 AQP1蛋白在NSCLC组、癌旁正常肺组织组及良性肿物组中的表达情况  170-172
      3.2.1 AQP1蛋白在NSCLC组、癌旁正常肺组织组及良性肿物组中的表达  170
      3.2.2 AQP1蛋白的表达与NSCLC临床病理的关系  170-172
    3.3 AQP1蛋白阳性表达与预后的关系  172-173
      3.3.1 肺癌AQP1蛋白阳性表达与生存时间的关系  172-173
      3.3.2 COX模型分析肺癌AQP1蛋白阳性与预后的关系  173
    3.4 NSCLC中AQP1和Ki67、MMP-9蛋白表达之间的关系  173-174
      3.4.1 AQP1和MMP-9在NSCLC中表达之间的相关性  173-174
      3.4.2 AQP1和Ki67在NSCLC中表达之间的相关性  174
    3.5 图片采集  174-176
  4.讨论  176-187
    4.1 AQP1在肺组织中的分布  177-178
    4.2 NSCLC中AQP1表达与临床病理特征的关系  178-182
    4.3 NSCLC中AQP1与MMP-9、Ki67之间的关系  182-185
      4.3.1 NSCLC中AQP1与MMP-9之间的关系  182-184
      4.3.2 NSCLC中AQP1与Ki67之间的关系  184
      4.3.3 AQP1蛋白阳性表达与肺癌患者预后的关系  184-185
    4.4 问题与展望  185-187
  参考文献  187-193

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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