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MMP-7和溶菌酶在DSS诱导的Balb/c小鼠溃疡性结肠炎模型发病机制中的作用

作　者: 康静静
导　师: 梁宏德；杨玉荣
学　校: 河南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 溃疡性结肠炎 Balb/c小鼠葡聚糖硫酸钠基质蛋白金属酶-7 溶菌酶 IL-6 RT-PCR 免疫组化 ELISA
分类号: S858.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

为了研究基质蛋白金属酶-7(Matrix Metalloproteinase-7, MMP-7)与溶菌酶在溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis, UC)发病过程中的作用及其作用机制,本试验以健康Balb/c小鼠为研究对象,试验组小鼠自由饮用7%的葡聚糖硫酸钠(Dextran Sodium Sulfate, DSS)溶液7 d制造急性UC模型,分别在用药后1 d, 3 d, 5 d, 7 d采用ELISA方法检测小鼠血清、大肠液、小肠液中的IL-6浓度水平,并采取小鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠,应用RT-PCR方法和免疫组化方法检测小鼠肠道中MMP-7基因和MMP-7、溶菌酶蛋白的动态表达规律,探讨其在UC发病过程中的作用。主要研究结果如下:1.健康小鼠饮用7%DSS溶液7d后,体重明显下降,DAI评分逐渐升高,与对照组小鼠相比,病理组织学观察试验组小鼠结肠可见明显的急性溃疡性结肠炎变化,说明成功复制了急性UC模型;ELISA检测小鼠血清、大肠液、小肠液的IL-6浓度水平,结果显示血清中IL-6含量的总体变化趋势是先升高再降低,3d时达到最高,且与0d、1d、5d、7d相比差异显著(P<0.05);大肠液中IL-6含量的总体变化趋势和血清中相似,先升高再降低,5d时达到最高水平,且与0d、7d相比差异显著(P<0.05),且UC活动期的IL-6水平高于对照组;而小肠液中IL-6含量的总体变化趋势不明显,无统计学意义;2. RT-PCR结果显示,急性UC模型小鼠炎症不同时期各肠道组织内MMP-7基因的mRNA表达水平呈现动态变化,且存在明显差异,具体情况如下:小肠组织中,回肠内MMP-7的mRNA表达量在炎症各个阶段都高于十二指肠和空肠,并且随着炎症的发生发展,十二指肠、空肠和回肠内MMP-7的mRNA表达量总体呈现上升趋势,7d时达到最高,十二指肠7d时MMP-7的mRNA表达量与0d、3d相比差异极显著(P<0.01),空肠7d时MMP-7的mRNA表达量与0d、1d、3d、5d相比差异极显著(P<0.01),回肠7d时MMP-7的mRNA表达量与5d相比差异显著(P<0.05);结肠3d时MMP-7的mRNA表达量最高,且与0d、1d、5d、7d相比差异极显著(P<0.01),7d时的表达量最低;3.免疫组化染色结果显示,急性UC模型小鼠炎症不同时期MMP-7阳性蛋白多表达在结肠肠腔内脱落的上皮细胞、炎性细胞,增生的结缔组织,浸润到黏膜下层的炎性细胞内;小肠肠腺底部的Paneth细胞也可见MMP-7阳性蛋白表达,且各肠道组织内MMP-7蛋白表达呈现动态变化,且存在明显差异,其中十二指肠3d时MMP-7的蛋白表达量最高,且与5d相比差异极显著(P<0.01),5d时表达量最低,且与0d、1d、3d、7d相比差异极显著(P<0.01);空肠1d时MMP-7的蛋白表达量最高,且与0d、3d、5d、7d相比差异均不显著(P>0.05);回肠0d时MMP-7的蛋白表达量最高,且与3d、5d、7d相比差异极显著(P<0.01),与1d相比差异显著(P<0.05);结肠3d时MMP-7的蛋白表达量最高,且与5d相比差异极显著(P<0.01);4.免疫组化染色结果显示,急性UC模型小鼠炎症不同时期溶菌酶阳性蛋白多表达在结肠肠腔内脱落的上皮细胞、炎性细胞,增生的结缔组织,浸润到黏膜下层的炎性细胞内;小肠肠腺底部的Paneth细胞也可见溶菌酶阳性蛋白表达,且各肠道组织内溶菌酶蛋白表达水平呈现动态变化,且存在明显差异,随着炎症的发展,小肠各肠段内溶菌酶的蛋白表达在炎症初期都呈现了明显的上升趋势,且十二指肠、空肠内的溶菌酶蛋白表达量在整个炎症发展过程中都高于正常,十二指肠5d时溶菌酶的蛋白表达量最高,且与0d、1d相比差异极显著(P<0.01);空肠7d时溶菌酶的蛋白表达量最高,且与0d、3d相比差异极显著(P<0.01),与1d相比差异显著(P<0.05);回肠1d时溶菌酶的蛋白表达量最高,且与0d、3d、7d相比差异极显著(P<0.01);结肠内的溶菌酶表达量在整个炎症发展过程中都高于正常,结肠1d时溶菌酶的蛋白表达量最高,且与0d、7d相比差异极显著(P<0.01)。以上试验结果表明,本研究成功地复制了急性UC模型,并且在正常小鼠肠道组织和UC小鼠肠道组织的小肠Panthe细胞和结肠组织内都有MMP-7和溶菌酶表达,其表达水平呈动态变化,具有差异性,说明它们的表达与Panthe细胞和UC疾病的发生发展存在密切的关系,在UC发病过程中具有重要作用,为进一步阐明UC的发病机制提供了理论基础,同时也为UC的临床治疗提供了试验依据。

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致谢 5-7摘要 7-91 文献综述 9-22 1.1 溃疡性结肠炎的研究进展 9-17 1.1.1 溃疡性结肠炎动物模型建立的研究进展及其在药效学中的应用 9-14 1.1.2 溃疡性结肠炎发病机制的研究进展 14-17 1.2 IL-6 在UC 发病机制中作用的研究进展 17-18 1.3 MMP-7 的研究现状 18-19 1.4 溶菌酶的研究现状 19-222 引言 22-243 材料与方法 24-33 3.1 Balb/c 小鼠肠道MMP-7 mRNA 的克隆及序列测定 24-28 3.2 DSS 诱导的Balb/c 小鼠急性UC 模型的建立 28-29 3.3 IL-6 含量在DSS 诱导的小鼠急性UC 模型中的变化情况 29-30 3.4 MMP-7 mRNA 在DSS 诱导的小鼠急性UC 模型各肠段组织中的表达 30-31 3.5 MMP-7、溶菌酶蛋白在DSS 诱导的小鼠急性UC 模型各肠段组织中的表达 31-334 结果与分析 33-46 4.1 Balb/c 小鼠MMP-7 基因的克隆及序列测定 33-34 4.2 DSS 诱导的Balb/c 小鼠急性UC 模型的建立 34-36 4.3 IL-6 含量在DSS 诱导的小鼠急性UC 模型中的变化规律 36-37 4.4 MMP-7 mRNA 在DSS 诱导的小鼠急性UC 模型各肠段组织中的表达 37-40 4.5 MMP-7、溶菌酶蛋白在DSS 诱导的小鼠急性UC 模型各肠道组织中的表达 40-465 讨论 46-51 5.1 UC 动物模型的建立 46-47 5.2 IL-6 在UC 发病过程中的作用 47 5.3 MMP-7 在UC 发病过程中的分布及作用 47-49 5.4 溶菌酶在UC 发病过程中的分布及作用 49-516 结论 51-52参考文献 52-60英文摘要 60-63图版与说明 63-67

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