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Mda-7/IL-24基因与卵巢癌耐药细胞凋亡及耐药性的实验研究

作　者: 熊炬
导　师: 彭芝兰
学　校: 四川大学
专　业: 妇产科学
关键词: mda-7/IL-24 腺病毒 感染 卵巢肿瘤 耐药性 细胞凋亡
分类号: R737.31
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


背景与研究目的：卵巢癌是死亡率极高的妇科恶性肿瘤，化疗在卵巢癌的治疗中有着重要的作用，但对化疗耐药严重制约着卵巢癌治愈率的提高，对于如何实现耐药逆转、提高化疗药敏感性一直是研究的热点。mda-7／IL-24基因具有选择性的诱导肿瘤细胞凋亡和调节细胞因子免疫功能双重作用，在多种肿瘤中被发现具有明显抗肿瘤作用，应用腺病毒介导该基因在肿瘤基因治疗方面有很好的应用前景，可能是一个理想的基因治疗功能基因。本研究探讨了mda-7／IL-24基因转染对卵巢癌耐药细胞的凋亡诱导和耐药性影响，了解该基因对卵巢癌耐药细胞的抗肿瘤作用，以寻求能逆转耐药的途经，为实现临床卵巢癌基因治疗提供基础研究。方法：利用Adeasy 1系统，从质粒pREP4-mda-7构建并鉴定人mda—7／IL—24基因重组腺病毒Ad．mda-7／IL-24，用构建的Ad．mda-7／IL-24感染卵巢癌耐药细胞株OVCAR-3，OVCAR-8和配对的A2780、A2780／DDP，了解mda-7／IL-24基因对卵巢癌耐药细胞的抗肿瘤作用，以及对它们生长和耐药性的影响。本研究分成三部分：1．构建Ad．mda-7／IL-24：从质粒pREP4-mda-7中扩增目的基因mda-7／IL-24，亚克隆至pAdTrack CMV穿梭质粒中，与pAdEasy 1质粒在E．coli BJ5183中进行同源重组为腺病毒载体质粒，线形化后转染293细胞进行包装扩增得到Ad．mda-7／IL-24并鉴定。2．Ad．mda-7／IL-24感染及凋亡诱导：感染人卵巢癌泰素耐药株OVCAR-8，RT—PCR法检测感染后mda-7／IL-24mRNA表达情况，Western-blot检测感染后MDA-7／IL-24蛋白表达。感染OVCAR-3，OVCAR-8细胞，用Hoechst33258凋亡染色和流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期改变。3．Ad．mda-7／IL-24感染对卵巢癌细胞株生长及耐药影响：MTT法检测OVCAR-3，OVCAR-8细胞感染Ad．mda-7／IL-24后生长情况，以及OVCAR-3，OVCAR-8，A2780、A2780／DDP四种细胞感染后对DDP，ADM，5—FU，Taxol四种化疗药物敏感性的变化。结果：1．重组腺病毒Ad．mda-7／IL-24经测序、酶切电泳表明构建成功，Ad．mda-7／IL-24病毒感染量为10μL时，感染OVCAR-8和OVCAR-3细胞可达100％转染率。2．Ad．mda-7／IL-24感染OVCAR-8细胞后，细胞mda-7／IL-24mRNA表达明显增高，未感染组和感染Ad．GFP组没有表达上的变化；感染24h后，MDA-7／IL-24蛋白表达明显，感染后48h和72h后，蛋白表达量明显增加，感染Ad．GFP及未感染组均未见蛋白表达。OVCAR-3和OVCAR-8两种细胞感染Ad．mda-7／IL-24后，随时间增加凋亡细胞逐渐增加，OVCAR-3细胞感染后48h和72h的凋亡指数与感染Ad．GFP组及未感染组有显著性差异，OVCAR-8细胞感染后24h、48h、72h的凋亡指数均比对照组高，有显著性差异，72h内OVCAR-3细胞最高凋亡率为14.1％，OVCAR-8细胞为32.4％。3．Ad．mda-7／IL-24感染OVCAR-3，OVCAR-8后细胞生长抑制明显，感染后两种细胞的泰素药敏分别提高2.76和1.52倍，OVCAR-3细胞对ADM和5-FU药敏分别提高1.6和3.01倍。Ad．mda-7／IL-24感染A2780和其顺铂耐药株A2780／DDP，感染后A2780细胞对DDP，5—FU，Taxol三种药的耐药性降低，DDP的药物敏感性提高了15.45倍，5-FU和Taxol的药物敏感性分别提高了2.15、3.63倍；A2780／DDP细胞对5—FU药敏提高了2.62倍。结论：成功构建了人mda-7／IL-24重组腺病毒Ad．mda-7／IL-24，并能有效感染卵巢癌耐药细胞株转染基因。mda-7／IL-24转染卵巢癌耐药细胞后可诱导肿瘤细胞凋亡，并有细胞有生长抑制作用，同时可逆转OVCAR-3，OVCAR-8细胞对泰素的耐药性，而对敏感细胞株A2780可提高对DDP、5-FU和Taxol的敏感性。

全文目录


中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
前言  12-15
第一部分:Ad.mda-7/IL-24的构建及病毒感染滴度化  15-36
  材料和方法  15-24
  结果  24-31
  讨论  31-36
第二部分:Ad.mda-7/IL-24感染卵巢癌耐药细胞及凋亡诱导  36-58
  材料和方法  36-45
  结果  45-55
  讨论  55-58
第三部分:Ad.mda-7/IL-24感染对卵巢癌细胞株生长及耐药影响  58-70
  材料和方法  58-62
  结果  62-66
  讨论  66-70
全文小结  70-72
参考文献  72-79
综述:Mda-7/IL-24:多功能肿瘤特异性凋亡诱导细胞因子  79-107
  正文  79-98
  参考文献  98-107
致谢  107

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
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