学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡及BMP通路相关基因表达的影响

作 者: 李新秀
导 师: 徐银学
学 校: 南京农业大学
专 业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 猪卵泡颗粒细胞 BMPR-IB RNAi 细胞凋亡
分类号: S828
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 15次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


BMPR-IB基因属于BMP家族的Ⅰ型受体,存在于许多细胞类型中,主要调节细胞生长和分化。在绵羊中,BMPR-IB基因中的碱基突变导致了氨基酸的改变,使得BMPR-IB基因部分失活,改变了BMP信号通路的传递机制,导致卵巢颗粒细胞对配体的抑制不再敏感,进而提高了绵羊的排卵率和繁殖力。近来发现,BMPR-IB基因的缺失,使小鼠卵巢颗粒细胞减少且聚集在一起,引起小鼠发情周期不规律和假孕反应。本研究以猪卵巢颗粒细胞为试验材料,利用流式细胞术、real time RT-PCR等方法检测沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响;用RNAi技术阻抑BMPR-IB基因表达,在此基础上,添加FSH,利用流式细胞术、real time RT-PCR等方法检测沉默BMPR-IB基因对FSH诱导的猪卵巢颗粒细胞的影响;用BMP配体(BMP6)激活BMP信号通路,用real time RT-PCR方法检测通路中受体及Smads的表达量。1 BMPR-IB-siRNA转染猪卵巢颗粒细胞及其效率检测根据猪BMPR-IB基因序列合成小分子RNA,利用脂质体转染猪卵巢颗粒细胞以及流式细胞仪检测转染效率,在BMPR-IB-siRNA转染浓度为100nmoL时,转染效率为63.22%;利用荧光定量PCR检测BMPR-IB mRNA表达水平,在作用36h时,BMPR-IB-siRNA抑制效果最好,试验组较空白组下降65%。利用流式细胞仪检测干扰后颗粒细胞凋亡率。结果显示,siRNA试验组凋亡率(16.86%)显著高于对照组(10.55%),且相应地抗凋亡基因Bcl-2表达量显著下降,表明沉默BMPR-IB可促进猪卵巢颗粒细胞的凋亡。2沉默BMPR-IB对FSH诱导猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响为了沉默BMPR-IB对FSH诱导猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响,采用RNAi技术沉默BMPR-IB基因然后添加FSH。利用流式细胞仪以及real time RT-PCR检测细胞的凋亡率和凋亡基因的表达量,以及类固醇相关合成酶的表达量。结果表明:FSH能抑制细胞凋亡,沉默BMPR-IB基因后再添加FSH使细胞凋亡率减弱但是效果不明显,与之对应的原凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的变化不明显;FSH能使FSHR的表达量增加,但是BMPR-IB表达的消减抑制了FSH增加自身受体的表达量;另外,发现添加FSH能使CYP19a1和CYP11a1的表达量增加,但BMPR-IB表达的消减抑制了FSH引起的CYP19a1和CYP11a1的表达的增加。3沉默BMPR-IB对BMP6诱导的BMP信号通路中相关基因表达的影响为了研究BMPR-IB-siRNA转染猪卵巢颗粒细胞对BMP信号通路的影响,采用RNAi技术沉默BMPR-IB基因,阻断信号传导,另一方面,添加BMP6来激活通路,利用real time RT-PCR分别检测阻抑或激活后受体和Smads的表达量。结果表明,沉默BMPR-IB能使受体BMPR-IA和BMPR-II的表达量增加,Smad1、Smad5和Smad8基因的mRNA表达量下降,Smad7基因的mRNA表达量显著增加。而添加配体BMP6使受体BMPRIA和BMPRII的表达量下降,Smad1、Smad5和Smad8基因的mRNA表达量增加,Smad7基因的mRNA表达量下降。BMPR-IB-siRNA阻抑通路后用BMP6激活,与BMP6组相比,受体基因BMPRIA和BMPRII以及Smadl和Smad5的表达都显著变化,但Smad8的表达量明显下降,而与抑制组相比,差异不显著;且无论添加BMP6与否,Smad7在沉默BMPR-IB后表达量都增加。

全文目录


中文摘要  7-9ABSTRACT  9-11缩略语  11-12文献综述  12-28  1 骨形成蛋白(BMP)的研究进展  12-17    1.1 BMPs的分类  12-13    1.2 BMPs的生物学功能  13-15    1.3 BMP受体的分类  15-16    1.4 BMPs受体的信号传导  16-17  2 BMPR-IB的研究进展  17-20    2.1 BMPR-IB基因的发现  17-18    2.2 BMPR-IB突变的分子的结构  18    2.3 BMPR-IB基因对动物繁殖性能的影响  18-20    2.4 BMPR-IB的作用机制  20  3 试验的目的与意义  20-22  参考文献  22-28试验研究  28-58  试验一 BMPR-IB-siRNA转染猪卵巢颗粒细胞效率的检测及对细胞凋亡的影响  28-42    1 材料与方法  28-35      1.1 材料  28-29      1.2 方法  29-35    2 结果与分析  35-37      2.1 流式细胞仪检测FAM-siRNA转染颗粒细胞的效率  35      2.2 siRNA转染颗粒细胞对BMPR-IB mRNA的表达的影响  35-36      2.3 沉默BMPR-IB对颗粒细胞凋亡的影响  36      2.4 沉默BMPR-IB对颗粒细胞凋亡相关基因的表达的影响  36-37    3 讨论  37-38    4 小结  38-40    参考文献  40-42  试验二 BMPR-IB-siRNA对FSH诱导的猪卵巢颗粒细胞凋亡影响  42-50    1 材料与方法  42-44      1.1 材料  42      1.2 方法  42-44    2 结果与分析  44-46      2.1 siRNA转染颗粒细胞对FSH诱导的细胞凋亡的影响  44      2.2 siRNA转染颗粒细胞对FSH诱导的细胞凋亡相关基因的表达的影响  44-45      2.3 siRNA转染颗粒细胞对FSH诱导的FSHR的影响  45-46      2.4 SiRNA转染颗粒细胞对FSH诱导的类固醇合成相关酶表达的影响  46    3 讨论  46-47    4 小结  47-48    参考文献  48-50  试验三 沉默BMPR-IB对BMP6诱导的BMP信号通路中相关基因表达的影响  50-58    1 材料与方法  50-52      1.1 材料  50      1.2 方法  50-52    2 结果与分析  52-54      2.1 BMPR-IB-siRNA转染颗粒细胞对BMP6诱导的BMP信号通路中相关基因表达的影响  52-54    3 讨论  54-55    4 小结  55-56    参考文献  56-58全文结论  58-60附录  60-62致谢  62

相似论文

  1. 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
  2. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  3. 利用RNAi提高烟草对病毒的抗性及岷江百合遗传转化体系的初步构建,S435.72
  4. 靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF1和ORF7 shRNA重组慢病毒的构建与鉴定,S852.65
  5. 醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究,X174
  6. 地克珠利对柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子甘油醛-3-磷酸脱氢酶的影响,S858.31
  7. PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞钙信号的影响及其机理初探,S858.28
  8. β-catenin在猪卵巢组织中的表达以及对猪卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇生成酶的影响,S828
  9. 伏马菌素B1和黄曲霉毒素B1联合诱导Vero细胞凋亡的研究,S856.9
  10. 黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导锦鲤原代肝细胞凋亡机制的初步研究,S856.9
  11. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对鸡软骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,S858.31
  12. Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响,S865.13
  13. 骨髓间充质干细胞预移植1周对大鼠心肌缺血再灌损伤的修复作用,R542.22
  14. 18氟—氟代脱氧葡萄糖诱导Eca-109食管癌细胞凋亡的初步研究,R735.1
  15. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导仓鼠肾细胞凋亡信号转导机制的研究,S856.9
  16. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导人结肠癌细胞凋亡线粒体信号转导机制的研究,R735.35
  17. 磷脂酶C和D在木聚糖酶诱导的水稻悬浮细胞抗病反应中的作用,S511
  18. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,S828
  19. 榄香烯对人肝癌HepG-2细胞拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ的影响,R735.7
  20. sCD40L对白血病HL-60细胞株生物学行为的影响及机制,R733.7

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 >
© 2012 www.xueweilunwen.com