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醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究

作　者: 朱家增
导　师: 贺秀媛；兰文升
学　校: 河南农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 铅 鲤鱼卵巢上皮细胞 氧化损伤 细胞凋亡 凋亡基因
分类号: X174
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 2次
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内容摘要


铅是一种严重的金属环境污染物,对于淡水鱼类有一定的毒性影响。包括铅在内的许多重金属可以进入鱼体内并且通过食物链进行富集,从而扰乱鱼类的正常活动,造成鱼类中毒或者死亡,最终对人类的健康造成威胁。但是目前对于重金属铅造成的淡水鱼类的中毒机制还不十分清楚。但它引起了广泛的生物学和生物化学等影响,例如引起酶活性的抑制,DNA合成阻碍,突变,染色体畸形,肿瘤以及繁殖障碍等。为了探讨铅对淡水鱼类的影响,本次试验采用醋酸铅染毒鲤鱼卵巢上皮细胞,并建立三个染毒剂量组:高剂量组(200μM·L-1)、中剂量组(100μM·L-1)、低剂量组(50μM·L-1)和空白对照组。采用24h、48h两个时间组,应用抗氧化物酶测定、脂质过氧化物测定、TUNEL染色和Annexin V-FITC PI双染色方法、PCR产物灰度分析,对细胞的氧化还原酶活性,细胞凋亡、细胞凋亡基因表达,首次系统的从细胞水平、分子水平进行铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究。研究结果显示:1随着染毒剂量和时间的增加醋酸铅可引起细胞的CAT、SOD、GPX、GR酶活性的抑制,各数据显著低于对照组（P<0.05）。MDA水平升高,与对照组相比差异显著（P<0.05）。结果表明醋酸铅作用可引起机体氧化损伤。2采用MTT法检测显示醋酸铅可引起鲤鱼卵巢上皮细胞增殖抑制,并且随着染毒剂量和时间的增加,其增殖抑制作用增强（P<0.05）;通过细胞形态观察可看到显著的凋亡特征,并且随着剂量和时间的增加其特征越明显。采用TUNEL染色和Annexin V-FITC PI双染色方法可以检测到鲤鱼卵巢上皮细胞发生凋亡,并且随着染毒剂量和时间的增加其细胞凋亡数目也随之增加。结果表明醋酸铅可抑制细胞增殖,并且引起细胞发生凋亡3醋酸铅作用细胞后,通过RT-PCR的方法以及PCR产物灰度分析得出抑制凋亡基因Bcl-2的表达量与染毒剂量和时间呈现反向效应关系,随着染毒剂量和时间的增长,Bcl-2的表达量逐渐减少。结果表明:醋酸铅作用可引起细胞凋亡基因Bcl-2的表达下调。

全文目录


致谢  4-8摘要  8-9符号说明  9-10第一章 铅毒性研究进展  10-17  1 铅中毒机制  10-14    1.1 铅与蛋白质高度亲和  10-11    1.2 铅与Ca~(+2)的竞争作用  11-12    1.3 铅导致基因受损  12    1.4 铅导致氧化损伤  12-13    1.5 铅的致癌性  13    1.6 铅诱导细胞凋亡  13-14  2 铅对水生动物各组织的影响  14-16    2.1 对铅的吸收方式  14    2.2 铅的分布与蓄积作用  14    2.3 铅对水生动物的毒性作用  14-16      2.3.1 铅对内分泌系统的毒性作用  14-15      2.3.2 铅对生殖系统的影响  15      2.3.3 铅对血液循环系统的影响  15      2.3.4 铅对排泄系统的影响  15-16  3 本试验研究的内容、目的和意义  16-17第二章 醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞(CO)抗氧化酶的影响  17-24  1 材料与方法  17-18    1.1 试验材料  17-18      1.1.1 细胞与细胞培养  17      1.1.2 主要试剂  17      1.1.3 主要仪器  17-18    1.2 试验方法  18      1.2.1 细胞培养及毒素作用  18      1.2.2 样品制备  18      1.2.3 测定样品中相关抗氧化物酶指标  18      1.2.4 数据统计分析  18  2 结果  18-21    2.1 醋酸铅对CO 细胞中过氧化氢酶（CAT）的影响  18-19    2.2 醋酸铅对CO 细胞中超氧化物岐化酶（SOD）的影响  19-20    2.3 醋酸铅对CO 细胞中谷胱甘肽还原酶（GR）的影响  20    2.4 醋酸铅对CO 细胞中谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）的影响  20-21    2.5 醋酸铅对CO 细胞中丙二醛（MDA）的影响  21  3 分析与讨论  21-23  4 结论  23-24第三章 醋酸铅对CO 细胞增殖的影响和细胞凋亡的诱导作用  24-35  1 材料和方法  24-27    1.1 试验材料  24-25      1.1.1 细胞与细胞培养  24      1.1.2 主要试剂  24      1.1.3 主要仪器  24-25    1.2 试验方法  25-27      1.2.1 CO 细胞生长活力检测  25      1.2.2 醋酸铅对CO 细胞形态学影响  25-26      1.2.3 TUNEL 法检测醋酸铅对CO 细胞的影响  26      1.2.4 Annexin-V-F 与PI 双染技术检测CO 细胞的影响  26      1.2.5 数据统计  26-27  2 结果  27-33    2.1 醋酸铅对CO 细胞生长活力的影响  27    2.2 醋酸铅对CO 细胞形态的影响  27-29    2.3 Annexin V-F ITC 和 PI 双染法检测醋酸铅对CO 细胞凋亡的诱导作用  29-31    2.4 TUNEL 法检测醋酸铅对CO 细胞凋亡的诱导作用  31-33  3 讨论  33-34  4 结论  34-35第四章 醋酸铅对CO 细胞凋亡基因Bcl-2 表达的影响  35-40  1 材料与方法  35-37    1.1 细胞与细胞培养  35    1.2 主要试剂  35    1.3 主要仪器  35-36    1.4 细胞培养及毒素作用  36    1.5 样品RNA 的制备  36    1.6 CO 细胞中BCL-2 表达量的检测  36-37      1.6.1 引物的设计  36-37      1.6.2 聚合酶链式反应（PCR）  37    1.7 统计学分析处理  37  2 结果  37-38    2.1 鲤鱼卵巢上皮细胞中bcl-2的相对表达量  37-38  3 讨论  38-39  4 结论  39-40小结  40-41参考文献  41-52英文摘要  52-53

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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境科学基础理论 > 环境生物学 > 环境动物学
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