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免疫层析定量测定AFP和RNA干扰K562细胞的研究

作　者: 赵露晶
导　师: 沈鹤柏
学　校: 上海师范大学
专　业: 物理化学
关键词: 上转换发光材料(UCP) 免疫层析技术 AFP 荧光纳米粒子 RNA干扰 K562细胞
分类号: R730.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 45次
引　用: 1次
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内容摘要

恶性肿瘤作为严重危害人类生命健康的重大疾病,已经成为人类社会广泛关注的焦点。本论文就目前常见的两种恶性肿瘤,通过构建多功能的纳米材料,研究其在肿瘤诊断和治疗方面的应用。1、基于上转换发光免疫层析定量检测甲胎蛋白(AFP)的研究采用水热合成法,以油酸为稳定剂合成上转换发光材料(UCP)。通过对其表面修饰与活化实现与生物活性分子的连接,并将其与免疫层析技术相结合,建立了一种快速、简便的甲胎蛋白(AFP)定量检测技术。评价了该方法的灵敏度、特异性、准确度和精密性,并通过临床100例血清样本,探讨上转换发光技术与化学发光检测方法的一致性。结果显示,该方法能在20min内完成,检测灵敏度达5 ng／ml,应用于其它肿瘤标志物CEA、CA199、FER、AFU和NSE的检测,无交叉反应。准确度与精密度均符合临床要求。与化学发光技术相比一致性较好,决定系数R2=0.9908。2、多功能siRNA复合物的合成及其对K562细胞干扰的研究。采用Stober法合成核壳型的荧光纳米粒子SiO2/FITC,通过TEM、紫外、荧光等分析技术进行表征。利用正负电荷间的静电作用,对其表面进行聚乙烯亚胺(PEI)修饰,进而成功构建多功能siRNA复合物,并作用于K562细胞。结果表明制备的荧光纳米粒子SiO2/FITC单分散性好,荧光强度大、性能稳定。由此构建的siRNA-PEI/SiO2/FITC复合物可以成功有效地转染进入K562细胞,并显著降低bcr/abl融合基因mRNA水平。由此可见,荧光纳米粒子SiO2/FITC不仅能作为载体,成功将siRNA转导进入细胞,而且可以起到细胞标记作用,监测复合物的整个传送与作用过程,不失为一种用于分析RNAi功效的有效工具。该方法也为肿瘤的治疗提供了一种新的可能。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-7
目录  7-10
第一章文献综述  10-23
  1.1 研究意义  10-11
  1.2 研究进展  11-19
    1.2.1 上转换发光材料及其在生物医学领域中的应用  11-13
    1.2.2 有机荧光染料及其在生物医学领域中的应用  13-14
    1.2.3 RNA干扰研究进展及其应用  14-17
    1.2.4 免疫层析技术  17-19
  1.3 实验方法和表征手段  19-22
    1.3.1 透射电子显微镜  19
    1.3.2 激光扫描共聚焦显微镜  19-20
    1.3.3 流式细胞仪  20
    1.3.4 凝胶电泳  20-21
    1.3.5 Stober法  21-22
  1.4 本论文研究的目的和研究内容  22-23
第二章上转换发光免疫层析技术定量检测甲胎蛋白的研究  23-35
  摘要  23
  2.1 引言  23-24
  2.2 实验方法  24-28
    2.2.1 实验试剂与材料  24-25
    2.2.2 实验仪器  25
    2.2.3 上转换发光颗粒(UCP)的制备  25
    2.2.4 UCP-AFP抗体复合物的制备  25-27
    2.2.5 免疫层析试纸的研制  27-28
    2.2.6 AFP定量检测方法的建立  28
  2.3 结果与讨论  28-33
    2.3.1 实验设计  28-29
    2.3.2 UCP颗粒的TEM表征  29
    2.3.3 UCP-AFP抗体复合物的表征  29-31
    2.3.4 AFP定量免疫层析试纸的研制及评价  31-33
  2.4 结论  33-35
第三章多功能SIRNA复合物的制备及对K562细胞干扰的研究  35-50
  摘要  35
  3.1 引言  35-37
  3.2 实验部分  37-40
    3.2.1 实验试剂  37
    3.2.2 实验仪器  37
    3.2.3 SiO_2/FITC荧光纳米粒子的制备  37-38
    3.2.4 SiO_2/FITC荧光纳米粒子的表面修饰  38
    3.2.5 PEI/SiO_2/FITC复合物表面氨基的定最测定  38-39
    3.2.6 PEI/SiO_2/FITC与双链siRNA的连接  39
    3.2.7 PEI/SiO_2/FITC结合siRNA凝胶阻滞实验  39
    3.2.8 多功能siRNA复合物转染进入K562细胞  39-40
    3.2.9 RT-PCR检测bcr/abl mRNA水平  40
  3.3 结果与讨论  40-49
    3.3.1 实验设计  40-41
    3.3.2 SiO_2/FITC荧光纳米粒子的制备与表征  41-44
    3.3.3 PEI/SiO_2/FITC复合物的表征  44-45
    3.3.4 复合物PEI/SiO_2/FITC与siRNA的结合及表征  45-47
    3.3.5 多功能siRNA复合物转染进入细胞的表征  47-48
    3.3.6 RT-PCR检测bcr-abl基因mRNA的水平  48-49
  3.4 结论  49-50
参考文献  50-59
致谢  59-60
论文和专利  60-62

免疫层析定量测定AFP和RNA干扰K562细胞的研究

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