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小麦籽粒硬度基因Pin的RNAi载体构建和遗传转化

作 者: 邹良英
导 师: 杨广笑;何光源
学 校: 华中科技大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 小麦 籽粒硬度 PinA PinB RNA干扰 遗传转化
分类号: S512.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 14次
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内容摘要


小麦籽粒硬度是决定小麦加工品质最重要的性状之一,它对小麦的出粉率、淀粉损伤及生面粉团的吸水性都具有很大的影响。小麦籽粒硬度主要由位于染色体5D短臂上两个基因Puroindoline a和b(PinAPinB)所控制,PinA和PinB基因的突变或缺失均能造成小麦胚乳质地的硬度增加。Pin基因的功能研究和转基因应用对小麦品质改良理论与实践均具有重要意义。本文主要通过RNA干扰技术,使PinA和PinB基因发生转录后沉默,Puroindoline蛋白表达量下降,以达到使普通六倍体小麦籽粒变硬的目的。这将为进一步研究小麦中PinA、PinB在影响籽粒硬度中的作用和生物学功能奠定基础;同时得到六倍体硬质小麦这种新型种质,为选育出适合不同终用途的优质专用小麦提供了很好的种质资源。本研究构建了能特异性引发PinB基因沉默的RNAi的载体,并结合本实验室前期已构建好的PinA基因RNAi载体,以六倍体小麦L88-31为受体材料,进行了3组不同质粒组合的遗传转化实验:PinA RNAi载体、PinB RNAi载体、PinA RNAi载体+PinB RNAi载体;通过基因枪介导的遗传转化法,获得转基因再生植株;利用PCR技术检测T0代转基因植株的外源片段,获得了阳性转基因植株。本论文的研究结果为最终获得六倍体硬质小麦新品种,以及阐明PinA、PinB在影响籽粒硬度中的作用和生物学功能奠定了基础。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-7
1 绪论  7-23
  1.1 小麦加工品质  7-9
  1.2 Puroindoline 蛋白  9-14
  1.3 RNAi 技术  14-20
  1.4 研究目的及意义  20-21
  1.5 研究技术路线  21-23
2 小麦PinB 基因的RNAi 载体构建  23-43
  2.1 材料和方法  23-33
  2.2 小麦PinB 基因RNAi 载体构建路线  33-35
  2.3 结果和分析  35-43
3 小麦Pin 基因RNAi 载体的遗传转化  43-55
  3.1 材料和方法  43-46
  3.2 小麦Pin 基因RNAi 载体的遗传转化技术路线  46-47
  3.3 结果和分析  47-55
4 总结和展望  55-57
  4.1 总结  55-56
  4.2 后续工作  56-57
致谢  57-58
参考文献  58-67
附录1 质粒图谱  67-70
附录2 pAHC25–PinB RNAi 载体测序结果  70

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 禾谷类作物 > > 小麦
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