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蛋白酶体抑制剂硼替佐米对K562细胞中MDR1表达的影响
作 者: 赵佳
导 师: 闫金松
学 校: 大连医科大学
专 业: 内科学
关键词: 硼替佐米 K562细胞 mdr1 逆转耐药 启动子
分类号: R733.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
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目的:在血液系统恶性肿瘤中,人多药耐药基因1(Multidrug Resistance gene 1,mdr1)的高表达与肿瘤的多药耐药性(Multidrug Resistance, MDR)有着密切关系,本研究旨在阐明蛋白酶体抑制剂硼替佐米对白血病细胞株K562中mdr1表达的影响,进而构建含人mdr1启动子的双荧光素酶报告基因质粒,以揭示蛋白酶体抑制剂逆转耐药的机制。方法:1.加药筛选K562/ADM耐药细胞株。2.MTT法验证耐药细胞株并检测其耐药倍数。3.MTT法检测不同浓度硼替佐米对K562/S、K562/ADM细胞的药物毒性,绘制生长抑制曲线并寻找到处理细胞的适当药物浓度。4.应用RT-PCR检测K562/S、K562/ADM细胞分别经硼替佐米5nM、10nM处理前后mdr1的表达情况。5.应用流式检测K562/ADM细胞经10nM硼替佐米处理前后mdr1的表达情况。6.应用分子克隆技术构建mdr1启动子的一系列5’端截短型的双荧光素酶报告基因质粒(包括-1499bp~+187bp,-505bp ~+187bp,-227bp ~+187bp,-121bp ~+187bp,-38bp~+187bp,-10bp~+187bp),并通过双酶切及测序法确定构建产物的正确性。结果:①加药筛选出的耐药细胞经测定耐药倍数为20.4倍;②硼替佐米对K562/S、K562/ADM细胞均存在细胞毒性,其细胞毒性与浓度呈正相关(P<0.05)。根据线性回归方程计算IC5分别为3.99nM、7.16nM;③RT-PCR证明硼替佐米能够在转录水平下调mdr1的表达。流式结果说明硼替佐米能够下调细胞内mdr1的表达;④双酶切及序列测定表明,构建产物正确。mdr1启动子序列与GenBank报道的相一致,且插入方向正确。结论:成功筛选了耐药细胞株K562/ADM,以该细胞为模型,验证蛋白酶体抑制剂硼替佐米能够在细胞内及转录水平下调mdr1的表达。为了阐明硼替佐米调控mdr1的分子机制,本研究还成功构建了mdr1启动子的双荧光素酶报告基因质粒,为深入研究mdr1启动子的转录活性奠定了实验基础。
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全文目录
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中文摘要 6-7英文摘要 7-9前言 9-10材料和方法 10-17结果 17-23讨论 23-26结论 26-27参考文献 27-30综述 30-39 参考文献 36-39附录 39-40致谢 40
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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