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细胞色素b基因RNA干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化

作　者: 周璇
导　师: 何光源；杨广笑
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物医学工程
关键词: 拟南芥细胞色素b基因 RNA干扰人工合成miRNA
分类号: Q943
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

植物细胞除细胞核外,叶绿体和线粒体也含有遗传物质DNA。随着基因组测序技术的不断改进,植物中已完成细胞核基因组、叶绿体基因组和线粒体基因组测序的物种数量在不断增加。通过生物信息分析法与生物实验相结合的方法来研究叶绿体基因组、线粒体基因组和细胞核基因组三者的结构和序列信息特征,可以揭示基因转移、物种的起源、进化的规律;此外还可为不同物种间的亲缘关系等方面的研究提供重要的理论依据。人工合成miRNA的干扰技术为研究细胞核和细胞器对基因表达调控的关系提供了有效的研究方法。细胞色素b(cytochrome b,cob)是呼吸链中的重要成员之一。由于细胞色素b基因在拟南芥细胞核基因组与线粒体基因组中都存在,并且都是单拷贝的基因,利用RNA干扰技术下调核基因组中cob基因的表达,可以明确细胞核和线粒体对该基因表达调控的关系。本研究利用人工合成miRNA的方法,构建了拟南芥细胞核基因组中cob基因干扰载体,并进行了拟南芥转化。取得的主要研究成果如下:1)通过分析内源miRNA选择靶基因的参数,参考WMD3提供的候选序列,完成细胞色素b基因amiRNA分子设计。2)根据所选择的前体完成引物设计。成功合成了重叠延伸所需模板和产物;运用重叠延伸PCR合成了amiRNA前体。测序结果表明,合成的amiRNA完全符合设计要求。3)通过农杆菌花药浸染法将干扰载体转入拟南芥。本文的研究结果,为探讨细胞核与线粒体对cob基因表达调控的关系与差异奠定了初步的基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
1 绪论  7-21
  1.1 植物的核基因组与线粒体基因组之间的基因转移  7-10
  1.2 植物基因工程  10-13
  1.3 植物RNA 干扰  13-19
  1.4 研究目的和意义  19-20
  1.5 本文实验技术路线  20-21
2 材料和方法  21-36
  2.1 实验材料  21-23
  2.2 实验方法  23-36
3 结果与分析  36-43
  3.1 目标片段1（c0b1）干扰载体构建  36-40
  3.2 目标片段2（c0b2）干扰载体构建  40-41
  3.3 农杆菌花药浸染法转化拟南芥及阳性植株筛选  41-42
  3.4 小结与讨论  42-43
4 总结与展望  43-45
  4.1 取得的成果  43
  4.2 课题展望  43-45
致谢  45-46
参考文献  46-52
附录1 质粒图谱和测序结果  52-58
附录2 攻读学位期间发表的论文目录  58

细胞色素b基因RNA干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化

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