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脂质体介导的VEGF-C siRNA治疗肺癌体外实验研究

作　者: 张璐
导　师: 钱永跃
学　校: 苏州大学
专　业: 胸心外科
关键词: 血管内皮生长因子C(VEGF-C) RNA干扰 肺癌 基因治疗
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:肺癌是我国高发的呼吸系统恶性肿瘤,通常与体内某些基因突变导致细胞周期改变和凋亡抑制有关。近年来的很多实验研究证明了VEGF-C在肿瘤的发生发展中起重要作用。本研究探讨通过体外合成靶向VEGF-C mRNA的小分子干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)经脂质体介导转染人肺癌A-549细胞株,观察对VEGF-C mRNA和VEGF-C蛋白表达的影响及对细胞生长和凋亡的作用。方法:设计合成VEGF-C编码基因序列特异小分子干扰RNA通过脂质体介导转染肺癌A-549细胞来沉默VEGF-C的表达。用荧光显微镜及倒置显微镜观察转染效率及转染后细胞形态学的变化;通过MTT实验方法,检测实验浓度的单纯siRNA及脂质体对A-549细胞的抑制作用,观察靶向的VEGF-C siRNA经脂质体介导体外感染肺腺癌A-549细胞生长抑制作用,并绘制细胞生长曲线。用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(western blotting)测定VEGF-C mRNA和蛋白的表达。用流式细胞术检测VEGF-C siRNA对A-549细胞凋亡的影响。应用透射电镜观察外源性VEGF-C siRNA转染A-549细胞后细胞超微结构的变化。结果:脂质体介导siRNA能有效转染肺腺癌A-549细胞。实验浓度的单纯siRNA及脂质体对A-549细胞无明显毒性。脂质体介导VEGF-C siRNA转染肺癌细胞48h后,实验组细胞贴壁浸润生长能力下降,部分细胞脱落皱缩,细胞形态变圆,体积缩小,折光性增强,空白对照组及实验对照组细胞正常生长。VEGF-C编码基因序列特异siRNA能有效抑制肺腺癌A-549细胞中VEGF-C mRNA和蛋白的表达,与空白对照组及实验对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。下调VEGF-C表达可以在体外显著抑制A-549细胞的生长及增殖,一定浓度范围内抑制率有浓度依赖性,下调VEGF-C能诱导A-549细胞凋亡增加,转染48h后实验组生长抑制率(38.87%)、细胞凋亡率(19.31±2.21)%显著高于对照组(P<0.05),且在透射电镜下发现转染siRNA后出现典型凋亡细胞,核染色质边集,分布不均匀。结论:RNA干扰技术能有效抑制VEGF-C mRNA和VEGF-C蛋白的表达,降低肺腺癌A-549细胞增殖能力,诱导其凋亡增加,为靶向VEGF-C siRNA治疗肺癌提供理论支持,RNA干扰作为一种治疗肺癌的手段值得进一步研究及推广。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-12
一 材料和方法  12-26
二 结果  26-36
三 讨论  36-46
结论  46-47
参考文献  47-55
综述  55-74
  参考文献  66-74
攻读学位期间撰写和发表的论文  74-75
中英文对照缩略词表  75-77
致谢  77-78

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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