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5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人红白血病K562细胞系生物学活性及DNA结合抑制因子4基因表达的影响

作　者: 王利芳
导　师: 李登举
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: DNA结合抑制因子4 K562细胞系 5-氮杂-2′-脱氧胞苷细胞周期细胞凋亡
分类号: R733.73
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

【目的】研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人慢性粒细胞白血病(CML)急红变细胞系K562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4(ID4)基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。【方法】1.应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)方法检测CML急红变细胞系K562细胞中ID4基因甲基化情况。2.实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测不同浓度5-Aza-CdR(0.5,2,5,10μM)处理K562细胞48h后ID4 mRNA的表达水平。3. FITC标记的膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)双染色流式细胞术分析不同浓度5-Aza-CdR作用24h,48h,72h后细胞凋亡率的变化,并分析5-Aza-CdR作用48h后细胞周期的变化。【结果】K562细胞中存在ID4基因的甲基化;5-Aza-CdR处理后K562细胞ID4 mRNA表达增加,并具有浓度依赖性。ID4基因的表达水平在不同药物处理组之间差异具有统计学意义(P < 0.01)。5-Aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,并且作用呈时间剂量依赖性。5μM 5-Aza-CdR处理K562细胞24h,48h,72h后细胞凋亡率分别为15.3%,17.6%,21.3%。不同浓度5-Aza-CdR(0.5,2,5,10μM)处理K562细胞48h后细胞凋亡率分别为6.9%,12.6%,17.6%,29.3%。与对照组相比,统计学差异具有显著性(P<0.05)。5-Aza-CdR处理K562细胞48h后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。0μM、2μM和5μM 5-Aza-CdR处理48h后G0/G1期细胞分别为26.45%,33.49%,40.68%;G2/M期细胞分别为17.54%,8.44%,6.48%。处理组与对照组相比,均有显著统计学差异(P<0.01)。【结论】甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR能促使CML急红变细胞系K562细胞中沉默的ID4基因重新表达,进而可能参与了K562细胞凋亡和细胞周期阻滞的调控。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
材料与方法  11-18
结果  18-25
讨论  25-27
参考文献  27-30
综述表观遗传学与癌症的关系研究  30-38
  参考文献  35-38
致谢  38

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人红白血病K562细胞系生物学活性及DNA结合抑制因子4基因表达的影响

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