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MCFP对肝癌细胞生物行为学影响初步研究

作　者: 笪倩
导　师: 汪思应；杨晓明
学　校: 安徽医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 慢病毒线粒体转运蛋白超家族成员 RNA干扰人肝癌细胞系HepG2
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

真核细胞线粒体是能量代谢的主要场所,线粒体的功能主要依赖于内膜上各种可溶性物质的跨膜转运,这种转运工作主要由可溶性物质载体(solute carrier,SLC)完成的。这些可溶性物质载体定位于线粒体内膜,组成了转运蛋白质家族(mitochondrial transporter family),主要包括SLC25家族。目前发现的SLC25家族成员共有14种,其中SLC25A40又名线粒体载体功能蛋白(mitochondrial carrier functional protein,MCFP),是中枢神经系统中鉴定到的SLC25家族新成员之一。MCFP作为一个新发现的基因,国内外有关其研究报道甚少。本研究首先通过普通PCR检测肝癌细胞系和正常肝细胞MCFP表达情况,实验证明大部分肝癌细胞系如HepG2细胞中MCFP表达量高于正常肝细胞。我们通过RNAi序列设计软件进行MCFP干涉片段设计,筛选出MCFP基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA,构建pSiCoR -MCFP慢病毒载体并包装产生慢病毒干涉毒液。运用病毒感染肝癌细胞系和正常肝细胞获得稳定干涉MCFP的细胞株,利用PCR和Western-blot方法检测稳定HepG2细胞株中MCFP的干涉效果,并运用稳定干涉HepG2细胞株检测干涉MCFP以后细胞行为学及线粒体功能的改变。实验成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体并获得了稳定干涉MCFP及对照的稳定细胞株。干涉MCFP后,HepG2细胞株中MCFP蛋白表达水平明显降低;细胞行为学方面细胞增殖明显减缓,细胞周期发生S期阻滞,在恶劣条件下细胞凋亡明显增加;线粒体功能方面干涉MCFP以后ATP含量降低,复合体I,II,IV,V活性明显下降。在本研究中我们探索了干涉MCFP以后HepG2细胞的细胞行为学及线粒体功能均发生变化,这一结果有助于我们进一步了解MCFP在HepG2细胞中的调控作用。对于MCFP功能的初步研究,为揭示线粒体蛋白质的功能及调控机制乃至其在疾病发生发展过程中的作用提供了线索。

全文目录

主要英文缩写一览表 5-7中文摘要 7-9英文摘要 9-11主要仪器设备和常用试剂的配制 11-15 一、主要仪器设备 11-12 二、常用菌株、载体 12 三、常用溶液的配制 12-15前言 15-18第一部分 MCFP 在肝癌细胞和正常肝细胞中差异表达及稳定干涉MCFP 细胞株建立 18-33 1 材料与方法 18-24 2 结果 24-30 3 讨论 30-33第二部分干涉MCFP 对HepG2 细胞的影响 33-47 1 材料与方法 33-37 2 结果 37-45 3 讨论 45-47结论 47-48参考文献 48-54个人简历 54-55致谢 55-56综述线粒体与糖尿病发病关系的研究进展 56-68 参考文献 65-68

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