学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

眠性变化家蚕的差异蛋白质组及DNA甲基化转移酶表达分析

作　者: 付凡
导　师: 赵巧玲
学　校: 江苏科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 家蚕眠性双向电泳质谱荧光定量PCR
分类号: S882
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 19次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

家蚕的眠性由常染色体上的主基因决定,同时又受伴性成熟基因的调节。家蚕的眠性很容易受到外界环境如催青温度、幼虫的营养条件等的影响发生变化,此外,家蚕体内保幼激素和蜕皮激素浓度的变化也会改变家蚕的眠性。为了探讨环境因素改变家蚕眠性的分子机制,通过环境条件的控制,诱导眠性变化,采用双向电泳技术(two-dimensional electrophoresis,2-DE)及ESI(electrospray ionization)质谱分析技术,对正常个体及其眠性变化个体大眠蜕皮前后血液、中肠进行差异蛋白质组学分析,以期找出与眠性相关的功能蛋白及调控基因;利用荧光RT-PCR技术检测其DNA甲基化转移酶基因(BmDnmt2)的表达水平,探索家蚕眠性变化与DNA甲基化可能存在的关系。所获结果如下:(1)经不同催青温度(高温28℃以及低温20℃)对三眠蚕品种“三眠A”和“白玉C·3A”以及四眠蚕品种“D92黄绿”眠性的影响调查,结果表明28℃的高温催青处理的三眠蚕品种“三眠A”和“白玉C·3A”均有较高的四眠蚕发生率;而在低温催青的条件下,四眠蚕发生率几乎为零。而催青温度对四眠蚕“D92黄绿”眠性的影响较小。进一步调查正常催青下三眠蚕品种中发生的四眠个体子代的眠性情况,发现其子代绝大部分表现三眠性状。(2)以四眠蚕品种“898黄绿”、“D92黄绿”和三眠蚕品种“三眠A”正常个体及其眠性变化个体为材料,利用双向电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术,对其大眠蜕皮前后血液和中肠组织蛋白质表达差异进行了分析鉴定。结果在血液中发现了转铁蛋白、胰凝乳蛋白酶抑制剂(CI)、Poly(A)结合蛋白、27kDa糖蛋白前体、核糖体蛋白和线粒体核糖体蛋白等13个上调或下调的差异表达蛋白点,推测这些蛋白的表达量变化与蚕体内保幼激素和蜕皮激素的代谢水平有关;在中肠组织中发现了FK506结合蛋白、肌动蛋白解聚因子以及前纤维蛋白的差异表达。(3)采用荧光定量PCR技术对眠性变化家蚕与正常家蚕大眠蜕皮前后BmDnmt2基因的表达水平进行了差异分析,在眠性变化家蚕与正常家蚕血液中BmDnmt2基因表达水平几乎没有差别,而在“898黄绿”发生的五眠蚕头部BmDnmt2基因表达水平在眠期时仅为正常家蚕的0.8,在起蚕期仅为正常家蚕的0.75,这表明五眠蚕个体中某些基因的甲基化程度降低,可能影响家蚕眠性。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-14
第1章绪论  14-22
  1.1 家蚕眠性的研究背景及进展  14-16
    1.1.1 家蚕眠性的研究背景  14
    1.1.2 家蚕眠性的变化机理及研究进展  14-16
  1.2 DNA甲基化的研究背景及进展  16-18
    1.2.1 DNA 甲基化转移酶的研究概述  16
    1.2.2 DNA 甲基化的研究进展  16-18
  1.3 家蚕蛋白质组学的研究背景及进展  18-20
    1.3.1 家蚕蛋白质组学研究背景及技术  18-19
    1.3.2 家蚕蛋白质组学研究进展  19-20
  1.4 本课题研究的目的意义和主要研究内容  20-22
第2章不同催青温度下家蚕品种的眠性性状调查  22-28
  2.1 引言  22
  2.2 材料与方法  22-23
    2.2.1 实验材料  22
    2.2.2 实验设计  22-23
  2.3 实验结果与分析  23-26
    2.3.1 不同催青温度处理下家蚕品种的眠性性状调查  23-25
    2.3.2 眠性变化的四眠个体其子代的眠性性状调查  25-26
  2.4 讨论  26
  2.5 本章小结  26-28
第3章家蚕正常个体与眠性变化个体大眠蜕皮前后蛋白质表达差异分析  28-59
  3.1 引言  28-29
  3.2 材料与方法  29-35
    3.2.1 实验材料  29
    3.2.2 实验仪器与试剂  29-31
    3.2.3 实验方法  31-35
  3.3 结果与分析  35-54
    3.3.1 Bradford法制作标准曲线  35-36
    3.3.2 “898 黄绿”正常四眠个体与五眠个体血液蛋白差异分析  36-40
    3.3.3 “D92 黄绿”正常四眠个体与三眠个体血液蛋白差异分析  40-43
    3.3.4 “三眠A”正常三眠个体与四眠个体血液蛋白差异分析  43-46
    3.3.5 “898 黄绿”正常四眠个体与五眠个体中肠组织蛋白差异分析  46-49
    3.3.6 “D92 黄绿”正常四眠个体与三眠个体中肠组织蛋白差异分析  49-51
    3.3.7 “三眠A”正常三眠个体与四眠个体中肠组织蛋白差异分析  51-54
  3.4 讨论  54-58
  3.5 本章小结  58-59
第4章眠性变化家蚕Dnmt2基因表达特征分析  59-68
  4.1 引言  59
  4.2 材料与方法  59-62
    4.2.1 实验材料、仪器与主要试剂  59-60
    4.2.2 实验方法  60-62
  4.3 结果与分析  62-66
    4.3.1 家蚕头部和血液总RNA 的提取  62-63
    4.3.2 “898 黄绿”五眠个体与正常四眠个体血液 BmDnmt2 基因的表达差异  63-64
    4.3.3 “三眠 A”四眠个体与正常三眠个体血液 BmDnmt2 基因的表达差异  64-65
    4.3.4 “898 黄绿”五眠个体与正常四眠个体头部 BmDnmt2 基因的表达差异  65-66
  4.4 讨论  66
  4.5 本章小结  66-68
结论  68-69
参考文献  69-76
附录其他差异点的肽质量指纹图谱  76-81
攻读学位期间发表的学术论文  81-82
致谢  82

眠性变化家蚕的差异蛋白质组及DNA甲基化转移酶表达分析

内容摘要

全文目录

相似论文