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花对称性基因SQU在露地菊‘火焰’中的遗传转化

作　者: 罗冉
导　师: 李玉花
学　校: 东北林业大学
专　业: 发育生物学
关键词: 百脉根露地菊‘火焰’ SQU基因花对称性遗传转化
分类号: S682.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 24次
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内容摘要

露地菊‘火焰’(Chrysanthemum morifolium’Huoyan’)是常用的园林绿化观赏花卉。其特点为：繁殖快,花型众多、颜色丰富、抗逆性强、观赏价值高等。本研究选取从百脉根(Lotus japonicas)中得到的SQU基因作为遗传转化基因,以潮霉素为筛选介质,采用农杆菌介导的方法转入露地菊‘火焰’,探寻高效稳定的遗传转化体系,培育拥有独特花瓣性状的新品种,研究SQU基因对于露地菊‘火焰’表型的影响,从而了解其进化、亲缘关系,扩充CYC类基因资源。主要研究结果如下：1露地菊‘火焰’遗传转化体系的建立通过对遗传转化中各影响因子的具体分析建立了高效的遗传转化体系。该体系为：利用30d苗龄的露地菊‘火焰’叶片外植体为材料,经预培养2d,用OD600值为0.4的农杆菌侵染10min,在25℃黑暗条件下共培养2d,进行4d延迟培养,以300mg/L的Cef为抑菌浓度,采用选择压递增的方式,初筛选采用8mg/L潮霉素,待出芽后切下转入采用10mg/L潮霉素的复筛培养基,将筛选后得到芽转入生根培养基至产生生根茁壮的转化植株。2转基因植株的获得将转化植株利用潮霉素引物进行PCR检测获得三个阳性植株,再利用基因特异性引物进行PCR检测获得与上步同样的三个阳性植株,确认此三株为成功的转基因植株。转化率为1.5‰。3转基因植株的表型观察利用非转基因植株实验得知,将植株栽培在含有土：蛭石=1：1的花盆并于人工气候箱培养15d后再于室内培养15d是非常高效的炼苗方式。将转基因植株炼苗后移栽入土地中,开花后对其表型观察发现：非转基因植株花较转基因植株花更为茂盛；非转基因植株花序全部为辐射对称,而转基因植株花序有辐射对称也有的不是辐射对称,呈现不完全的辐射对称性；非转基因植株舌状花瓣的畸形率为5%,转基因植株舌状花瓣的畸形率为3.3%。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 绪论  8-17
  1.1 转基因技术在园林植物中的应用  8
  1.2 绿色荧光蛋白GFP以及在转基因中的应用  8-10
  1.3 菊花转基因的进展  10-12
    1.3.1 花色转基因的研究  10
    1.3.2 植物形态转基因的研究  10-11
    1.3.3 花期调控转基因的研究  11
    1.3.4 株型改变转基因的研究  11
    1.3.5 抗性增强转基因的研究  11-12
  1.4 花对称性的研究  12-15
    1.4.1 花对称性概述  12-14
    1.4.2 花对称性在遗传中的控制  14
    1.4.3 SQU基因概述  14-15
  1.5 研究的目的意义  15-16
  1.6 技术路线  16-17
2 花对称性基因SQU在露地菊‘火焰’中的遗传转化  17-31
  2.1 实验材料  17-18
    2.1.1 植物材料  17
    2.1.2 实验试剂  17
    2.1.3 基本培养基  17
    2.1.4 植物的转基因载体  17-18
    2.1.5 实验仪器设备  18
  2.2 实验方法  18-22
    2.2.1 露地菊‘火焰’培养体系的建立  19
    2.2.2 农杆菌介导的转化体系  19-20
    2.2.3 抗生素浓度敏感性测试  20-21
    2.2.4 转化体系中参数的优化  21-22
  2.3 结果与分析  22-30
    2.3.1 抗生素浓度敏感性结果与分析  22-24
    2.3.2 转化体系中参数优化结果与分析  24-29
    2.3.3 转化植株的筛选与获得  29-30
  2.4 本章小结  30-31
3 转基因植株的分子检测及表型观察  31-40
  3.1 实验材料  31
    3.1.1 植物材料  31
    3.1.2 实验试剂  31
    3.1.3 实验仪器设备  31
  3.2 研究方法  31-34
    3.2.1 质粒的提取  31-32
    3.2.2 DNA的提取  32
    3.2.3 PCR检测  32-33
    3.2.4 表型观察  33-34
  3.3 结果与分析  34-39
    3.3.1 PCR检测结果  34-35
    3.3.2 表型观察的结果分析  35-39
  3.4 本章小结  39-40
4 讨论  40-41
  4.1 头孢霉素在筛选中浓度的变化问题  40
  4.2 转基因植株花序呈现不完全辐射的问题  40
  4.3 转基因植株舌状花瓣平均数目少，畸形率低的问题  40-41
结论  41-42
参考文献  42-46
攻读学位期间发表的学术论文  46-47
致谢  47-48

花对称性基因SQU在露地菊‘火焰’中的遗传转化

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