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‘突尼斯软籽’石榴再生体系和GFP报告基因的瞬时表达研究初报

作 者: 连红可
导 师: 陈延惠
学 校: 河南农业大学
专 业: 果树学
关键词: ‘突尼斯软籽’石榴 叶片再生 茎段再生 绿色荧光蛋白 遗传转化
分类号: S665.4
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


以‘突尼斯软籽’石榴叶片和茎段为外植体,探讨了‘突尼斯软籽’石榴叶片和茎段的再生体系、不同浓度抗生素对外植体的影响以及GFP报告基因的瞬时表达体系。研究结果如下:1.建立了‘突尼斯软籽’石榴叶片再生体系。研究结果表明:从人工气候室采摘的离体叶片用0.1% HgCl2灭菌4min效果最好;叶片分化愈伤组织的最佳培养基为MS+BA1.0mg/L+ NAA0.3mg/L;诱导不定芽的最佳的培养基为MS+NAA0.3mg/L+TDZ1.5mg/L+KT1.0mg/L;不定芽抽生成茎段,效果最好的培养基为MS+NAA1.0mg/L+BA0.2mg/L+KT1.0mg/L;生根培养基为MS+1/2NAA0.5mg/L,其根系较粗壮,生根移栽后的成活率可达85%。2.建立了‘突尼斯软籽’石榴茎段再生体系。研究结果表明:从人工气候室采摘的离体茎段用0.1% HgCl2灭菌3min效果最好;茎段分化愈伤组织的最佳培养基为MS+ NAA 0.1 mg/L + TDZ 1.0mg/L ;愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+NAA0.2mg/L+TDZ1.0mg/L+KT1.0mg/L ;不定芽抽生茎段,效果最优的培养基为MS+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L;之后将这些茎段放入生根培养基MS+1/2NAA0.5mg/L后,产生比较粗壮的根系,生根之后移栽即可成活,成活率可达85%以上。3.比较了两种‘突尼斯软籽’石榴再生体系的优越性。研究结果表明:综合各种因素,叶片再生效果比茎段效果更佳。4.筛选了‘突尼斯软籽’石榴外植体对聚乙烯吡咯烷酮的浓度。研究结果表明:聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为1.0g/L时效果最佳。5.筛选了‘突尼斯软籽’石榴抗生素的浓度。研究结果表明:卡那霉素(Kan)的浓度为50mg/L时,愈伤组织受到明显抑制,可以用来筛选转基因材料;头孢霉素(Cef)的浓度为500mg/L时,可以有效抑制菌株的生长。6.初步研究了GFP报告基因的瞬时表达情况。但结果表明:转化材料与对照均发出绿色荧光,两者差异不明显。

全文目录


致谢  4-8摘要  8-91 文献综述  9-24  1.1 石榴栽培现状  9-14    1.1.1 石榴概况  9-10      1.1.1.1 石榴的保健价值  9      1.1.1.2 石榴的药理学研究进展  9      1.1.1.3 综合开发与利用研究  9-10    1.1.2 石榴的地域分布  10-11    1.1.3 石榴主要品种  11    1.1.4 河南省石榴的生产与栽培现状  11-12    1.1.5 石榴生产与栽培中存在的问题  12-14      1.1.5.1 石榴的苗木繁育  12      1.1.5.2 品种优化  12      1.1.5.3 育苗体系的建立  12      1.1.5.4 自然灾害  12-14  1.2 组培现状  14-21    1.2.1 组培的目的及意义  14-16      1.2.1.1 快速繁殖优良种苗  14      1.2.1.2 无病毒苗的培养  14      1.2.1.3 在育种上的应用  14-15      1.2.1.4 利用组织培养可以有效地开展生物遗传转化体系的研究  15      1.2.1.5 工厂化育苗  15-16    1.2.2 组织培养在果树生产中的应用  16-21      1.2.2.1 胚培养  16-17      1.2.2.2 叶片离体培养  17-18      1.2.2.3 茎段培养  18-21  1.3 报告基因GFP 转化现状  21-24    1.3.1 GFP 基因的简介  21-22    1.3.2 GFP 基因的应用现状  22-23      1.3.2.1 GFP 作为基因表达载体及重组病毒( 细菌) 的报告基因  22-23      1.3.2.2 GFP 用于开发转基因彩色品种  23      1.3.2.3 GFP 可以作为体内宿主与病原体相互作用的标记物  23      1.3.2.4 GFP 基因可以提高转基因产物的利用率  23      1.3.2.5 GFP 在临床诊断和基因治疗研究中的应用  23      1.3.2.6 GFP 用于转基因安全与生物防治  23    1.3.3 GFP 基因检测中的问题  23-24  1.4 报告基因瞬时表达体系建立  242 引言  24-253 材料与方法  25-32  3.1 试验材料  25-26    3.1.1 转化受体材料  25    3.1.2 菌株与质粒  25    3.1.3 培养基配方  25-26    3.1.4 主要生化试剂  26  3.2 试验方法  26-32    3.2.1‘突尼斯软籽’石榴叶片再生体系的建立  26-28      3.2.1.1 扦插苗和无菌苗的培养  26      3.2.1.2 叶片接种与培养  26-27      3.2.1.3 不定芽的培养  27      3.2.1.4 不定芽抽生茎段的培养  27      3.2.1.5 再生植株生根成苗和移栽  27-28    3.2.2 ‘突尼斯软籽’石榴茎段再生体系的建立  28-30      3.2.2.1 扦插苗和无菌苗的培养  28-29      3.2.2.2 灭菌方法  29      3.2.2.3 茎段接种与愈伤培养  29      3.2.2.4 不定芽的诱导  29-30      3.2.2.5 不定芽抽生茎段的培养  30      3.2.2.6 再生植株生根成苗和移栽  30    3.2.3 抗褐化剂处理  30-31      3.2.3.1 抗褐化剂的不同处理  30      3.2.3.2 实验结果观察与统计方法  30-31    3.2.4 转化受体对抗生素敏感性实验  31      3.2.4.1 转化受体对卡那霉素敏感性试验  31      3.2.4.2 转化受体对头孢霉素敏感性试验  31    3.2.5 GFP 报告基因的转化  31      3.2.5.1 农杆菌培养和活化  31      3.2.5.2 浸染方式  31      3.2.5.3 共培养  31      3.2.5.4 筛选培养  31      3.2.5.5 遗传转化流程图  31    3.2.6 根癌农杆菌介导的石榴遗传转化  31    3.2.7 GFP 荧光检测  31-324. 结果与分析  32-39  4.1‘突尼斯软籽石榴’叶片再生体系的建立  32-34    4.1.1 叶片再生愈伤组织  32-34      4.1.1.1 不同灭菌时间对叶片灭菌效果的影响  32-33      4.1.1.2 不同激素配比对叶片再生愈伤组织的影响  33      4.1.1.3 不同激素配比对叶片再生不定芽的影响  33-34    4.1.2 不同激素配比对愈伤再生不定芽的影响  34    4.1.3 不同激素配比对不定芽抽生茎段的影响  34    4.1.4 生根移栽  34  4.2‘突尼斯软籽石榴’茎段再生体系的建立  34-36    4.2.1 茎段再生愈伤组织  34-35      4.2.1.1 不同灭菌时间对茎段的影响  34-35      4.2.1.2 不同激素配比对茎段愈伤组织的影响  35    4.2.2 不同激素配比对不定芽的再生的影响  35-36    4.2.3 不同激素配比对不定芽抽生愈伤组织的影响  36    4.2.4 生根移栽  36  4.3 两种再生体系的比较  36-37  4.4 抗褐化剂处理  37-38  4.5 转化受体材料对抗生素的敏感性  38-39    4.5.1 转化受体材料对卡那霉素的敏感性  38    4.5.2 转化受体材料对头孢霉素的敏感性  38-39  4.6 GFP 报告基因的瞬时表达体系初建  39    4.6.1 菌液浓度对GFP 基因瞬时表达的影响  39    4.6.2 浸染时间对GFP 基因瞬时表达的影响  39    4.6.3 共培养时间对 GFP 基因瞬时表达的影响  395 结论与讨论  39-44  5.1 结论  39-40  5.2 讨论  40-44参考文献  44-50ABSTRACT  50-52附图说明  52-62

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 杂果类 > 石榴
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