学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

斜带石斑鱼Ghrelin的酵母表达及表达产物的活性研究

作　者: 武丽娟
导　师: 林浩然；李文笙
学　校: 中山大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 斜带石斑鱼 DesacylGhrelin 毕赤酵母表达活性分析
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 122次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

斜带石斑鱼在东南亚和中国南部,是重要的经济海水鱼种之一,斜带石斑鱼具有巨大的经济价值,国内外有不少学者对其进行研究报道。脑肠肽(Ghrelin)是一种活性多肽,Ser3具有辛酰化修饰,这种酰基化修饰结构是其与受体结合以及功能发挥所必须,前体pre-pro-ghrelin除了形成Ghrelin外,还会通过不同的翻译前剪切修饰形成另外两种不同形式的多肽:DesacylGhrelin和Obestatin,到目前为止,大量研究表明Ghrelin是促摄食的调节剂,但是对于DesacylGhrelin和Obestatin在促摄食方面的影响目前了解的比较少,甚至存在比较大的分歧。本论文以斜带石斑鱼DesacylGhrelin为对象,主要研究结果如下:1.在本实验室前期工作的基础上,以已经克隆得到Ghrelin的cDNA为模板,分别在上游引物和下游引物带上酶切位点(XbaI,NotI),以cDNA为模板扩增出目的条带,构建了毕赤酵母表达载体pPICZɑA-D/ghr,并获得了诱导型分泌表达重组DesacylGhrelin的X-33菌株,筛选出高拷贝的阳性克隆,表达目的蛋白,优化表达条件。2.给斜带石斑鱼腹腔注射不同剂量的DesacylGhreli(n1μg/gB.W.和2μg/gB.W.)3h,6h后均能使斜带石斑鱼垂体的生长激素(Growthhormone,GH)mRNA的表达水平升高,而且剂量越高,作用时间越长,这种作用越明显。腹腔注射不同剂量的DesacylGhrelin(1μg/gB.W.和2μg/gB.W.)3h,6h后均能使斜带石斑鱼下丘中的神经肽Y(NeuropeptideY,NPY)mRNA的表达水平降低.其中注射不同剂量DesacylGhrelin(1ug/gBW和2ug/gBW),作用时间为6h与对照组相比,表现出极显著差异(p<0.01);腹腔注射DesacylGhrelin(2μg/gB.W.)作用时间6h后斜带石斑鱼下丘中生长抑素I型前体(PreprosomatostatinI,PSSI)mRNA表达量升高与对照组相比表现出显著差异(p<0.05);腹腔注射不同剂量的DesacylGhrelin(1μg/gB.W.和2μg/gB.W.)6h后均能使斜带石斑鱼下丘中的促生长激素释放a型受体(GrowthHormoneSecretagogueReceptor,GHSR-1a)mRNA的表达水平降低.表现出极显著差异(p<0.01).3.对斜带石斑鱼下丘碎片和垂体细胞进行孵育实验,不同剂量的DesacylGhrelin孵育下丘脑的碎片时,随着DesacylGhrelin剂量的增高,NPY的mRNA的水平逐渐降低,在1000nM的时候NPY的mRNA表达水平达到最低值,与对照组的NPY的mRNA的水平相比有极显著差异(P﹤0.01);抑制下丘脑GHSR-1a的mRNA的表达,在DesacylGhrelin浓度达到1000nM的时候GHSR-1amRNA与对照组的GHSR-1a的mRNA的水平相比有显著差异(P﹤0.05);促进下丘脑PSSI的mRNA的表达,在DesacylGhrelin浓度达到1000nM时与对照组相比有显著差异(P﹤0.05);随着剂量的增高,GH的mRNA的水平也逐渐增高,在1000nM的的时候GH的mRNA表达水平达到最高值,与对照组的GH的mRNA的水平相比有极显著差异(P﹤0.01)。4.化学合成了斜带石斑鱼Ghrelin以及Ser3非辛酰化修饰的DesacylGhrelin蛋白,采用喷涂法拌入常规饵料中,对鱼龄八个月的石斑鱼进行50天的投喂实验显示DesacylGhrelin对鱼的体重,体长有明显的促进作用,Ghrelin则无明显作用;投喂含有斜带石斑鱼Ghrelin的饵料,检测GH,NPY,GHSR-1a的mRNA水平发现,其均有促进作用,DesacylGhrelin对GH,GHSR-1a的mRNA无明显的影响作用,但是对NPY有促进作用。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-8
目录  8-10
前言  10-31
  1 Desacyl Ghrelin 研究进展  10-22
  2 巴斯德毕赤酵母表达系统  22-28
  3 研究对象,目的,意义及创新点  28-30
  4 本研究的技术路线  30-31
第一章斜带石斑鱼Desacyl Ghrelin 在毕赤酵母野生型菌株X-33 中的表达  31-66
  第一节斜带石斑鱼Desacyl Ghrelin 表达载体的构建  32-45
    1.1.1 材料  32-34
    1.1.2 方法  34-40
    1.1.3 结果  40-43
    1.1.4 讨论  43-45
  第二节重组表达质粒pPICZɑA-D/Ghrelin 在毕赤酵母野生型菌株X-33 中的表达  45-66
    1.2.1 材料  45-50
    1.2.2 方法  50-58
    1.2.3 结果  58-63
    1.2.4 讨论  63-66
第二章重组斜带石斑鱼Desacyl Ghrelin 的生物活性研究—在体研究  66-80
  2.1 材料  66-69
  2.2 方法  69-71
  2.3 结果  71-77
  2.4 讨论  77-80
第三章重组斜带石斑鱼Desacyl Ghrelin 的生物活体研究—离体研究  80-93
  3.1 材料  81-83
  3.2 方法  83-86
  3.3 结果  86-90
  3.4 讨论  90-93
第四章化学合成辛酰化Ghrelin 和去辛酰化Desacyl Ghrelin 的生物活性研究-在体研究  93-105
  4.1 材料  93-94
  4.2 方法  94-96
  4.3 结果  96-102
  4.4 讨论  102-105
总结  105-106
参考文献  106-117
附录Ⅰ  117-119
致谢  119

斜带石斑鱼Ghrelin的酵母表达及表达产物的活性研究

内容摘要

全文目录

相似论文