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Gsα的过表达和缺失对果蝇大脑发育的影响

作　者: 姜文超
导　师: 罗弘
学　校: 清华大学
专　业: 生物学
关键词: G蛋白信号通路 Gsα 果蝇大脑过量表达失活
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

G蛋白信号通路是细胞内的一条重要的信号通路,参与包括基因转录、细胞增殖等很多过程。G蛋白复合体包括α、β、γ三个亚基,其中最重要的是Gα亚基,Gα亚基主要是通过cAMP-PKA信号通路来向下游传递信号。研究显示,Gα亚基的突变可以影响细胞内的离子通道的活性,Gαi调节果蝇神经母细胞的不对称分裂中纺锤体的方向并影响果蝇神经母细胞的不对称分裂,但目前尚未有Gsα对果蝇大脑发育影响的相关报道。为了研究Gsα对果蝇大脑发育的影响,我们设计了Gsα过度激活和缺失的实验。通过GAL4-UAS体系来过表达Gsα基因,通过hsGAL4-UAS体系来研究Gsα的激活突变基因短暂和大量的表达对果蝇神经发育的影响,同时通过FLP-out系统来研究果蝇大脑部分细胞群过表达Gsα的激活突变基因对细胞发育命运的影响。同时,我们通过体细胞克隆的技术构建表达Gsα缺失突变体的果蝇突变体。研究结果显示,在25℃及31℃培养条件下,Gsα的过表达对果蝇会产生致死效应,在hsGAL4驱动Gsα激活突变基因过表达的实验中,有个别果蝇的大脑发育命运发生了变化。表达Gsα失活突变基因的果蝇三期幼虫的大脑形态未发生显著变化,Gsα基因的失活对果蝇大脑细胞的细胞周期也未产生显著影响。

全文目录

摘要 3-4Abstract 4-8第1章引言 8-23 1.1 果蝇中枢神经系统介绍 8-11 1.1.1 果蝇中枢神经系统概述 8-9 1.1.2 果蝇大脑发育过程控制及“区室”形成概述 9-10 1.1.3 神经母细胞发育介绍 10-11 1.2 G 蛋白信号通路 11-21 1.2.1 G 蛋白家族的主要成员及结构功能 11-13 1.2.2 G 蛋白偶联受体介绍 13-15 1.2.3 G 蛋白家族的信号转导过程 15-16 1.2.4 G 蛋白信号通路的调控 16-18 1.2.5 G 蛋白信号转导过程的终止 18 1.2.6 G 蛋白家族重要的生理调控功能 18-20 1.2.7 Gsα-cAMP-PKA 信号通路介绍 20-21 1.3 本项目研究的立论基础和意义 21-23 1.3.1 立论基础 21 1.3.2 研究意义 21-22 1.3.3 研究现状 22-23第2章材料与方法 23-30 2.1 实验材料 23-24 2.1.1 果蝇基础培养基 23 2.1.2 主要试剂 23 2.1.3 实验所用主要仪器 23-24 2.1.4 实验所用果蝇品系及培养条件 24 2.2 实验方法 24-30 2.2.1 免疫组化 24-25 2.2.2 遗传杂交手段 25 2.2.3 GAL4-UAS 系统 25-26 2.2.4 hsGAL4-UAS 系统 26 2.2.5 GAL80-GAL4-UAS 系统 26-27 2.2.6 FLP/FRT 系统 27-28 2.2.7 FLP-out 系统 28-30第3章实验结果 30-39 3.1 N6490 品系的构建 30 3.2 在16℃下诱导Gsα过表达果蝇大脑表型分析 30-32 3.3 31℃和 25℃下 Gsα过表达会对果蝇幼虫产生致死效应 32-34 3.4 用GAL80-GAL4-UAS 系统过表达Gsα的结果分析 34-36 3.5 用 hsGAL4 过表达 Gsα 导致个别果蝇幼虫大脑形态发生改变 36 3.6 用 Flp-out 方法过表达 Gsα 及所得结果分析 36-37 3.7 Gsα 基因的失活对果蝇大脑发育形态的影响 37-39第4章讨论 39-40参考文献 40-43致谢 43-44附录 A 硕士期间研究的其它主要课题 44-53个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 53

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