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三种水草植株再生及遗传转化研究

作　者: 吴丽爽
导　师: 王晓萍
学　校: 哈尔滨师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 小对叶红波金钱草组织培养遗传转化
分类号: S682.32
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 16次
引　用: 2次
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内容摘要

本研究以水生植物小对叶(Bacopa monnieri)、红波(Alternanthera bettzickiana)、金钱草(Lysima chiachristinae Hance)为试验材料,建立了三种水草的组织培养再生体系及根癌农杆菌介导的小对叶遗传转化体系。主要结果概述如下：(1)通过研究不同生长调节剂的浓度配比对小对叶愈伤组织、不定芽和根诱导的影响,筛选出诱导愈伤组织、不定芽和根的最佳培养基,优化了小对叶再生体系。试验结果表明：小对叶叶盘在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L培养基上的诱导率和生长状态都最好,是小对叶愈伤组织诱导和增殖的最佳选择。愈伤组织在分化培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L上的诱导率最高,长势最好,分化率可达100％。小对叶的壮苗培养基为MS+6-BA0.5mg/L。再生芽在培养基1/2MS+IBA0.1mg/L上生根率可达100％。(2)红波：以叶片为外植体,愈伤组织诱导采用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L的培养基,芽诱导采用MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L+AD10mg/L的培养基,茎尖芽诱导采用MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L培养基,继代培养采用MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L的培养基,根诱导采用1／2MS+IBA0.5mg/L的培养基。金钱草：以茎尖为外植体,芽诱导采用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L的培养基,继代培养用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L的培养基,根诱导采用1／2MS+IBA0.5mg/L的培养基。(3)根癌农杆菌介导小对叶转化最佳条件的确定。试验结果表明：叶盘预培养2d、OD600为0.5、侵染7min、共培养4d和延迟筛选7d时,小对叶遗传转化率最高。(4)转基因小对叶的PCR检测。经抗性筛选得到的转基因苗,通过PCR扩增,部分转基因植株中检测出有目的基因存在,说明已将目的基因成功插入到小对叶的基因组中并表达。其转化率为21.43％。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-9
第1章绪论  9-17
  1.1 水生观赏植物组织培养研究进展  9-14
    1.1.1 水生观赏植物组织培养研究概况  9-11
    1.1.2 培养基成份的研究  11-13
    1.1.3 问题及展望  13-14
  1.2 小对叶的生物学特性  14-15
  1.3 本研究的目的和意义  15-17
第2章三种水草植株再生体系的建立与优化  17-36
  2.1 引言  17
  2.2 试验材料  17-18
    2.2.1 植物材料  17
    2.2.2 培养基及培养条件  17
    2.2.3 主要仪器设备  17-18
  2.3 试验方法  18-20
    2.3.1 外植体的处理  19
    2.3.2 愈伤组织的诱导  19
    2.3.3 愈伤组织的增殖  19-20
    2.3.4 诱导芽的分化  20
    2.3.5 生根培养  20
    2.3.6 炼苗和移栽  20
  2.4 结果与分析  20-33
    2.4.1 小对叶组织培养体系的建立与优化  20-30
    2.4.2 红波及金钱草组织培养体系的建立与优化  30-33
  2.5 讨论  33-35
    2.5.1 材料的选择及预处理  33-34
    2.5.2 组织培养中褐化现象的探讨  34-35
  2.6 本章小结  35-36
    2.6.1 小对叶组织培养体系的建立与优化  35
    2.6.2 红波及金钱草组织培养体系的建立与优化  35-36
第3章农杆菌介导的小对叶遗传转化研究  36-62
  3.1 引言  36
  3.2 试验材料  36-38
    3.2.1 植物材料  36-37
    3.2.2 菌株与质粒  37
    3.2.3 主要化学试剂  37
    3.2.4 主要仪器设备  37-38
  3.3 试验方法  38-46
    3.3.1 根癌农杆菌的培养  41
    3.3.2 脱菌培养中抗菌素浓度的确定  41-42
    3.3.3 筛选培养中选择压的确定  42
    3.3.4 遗传转化体系的建立  42-43
    3.3.5 转基因植株的检测  43-46
  3.4 结果与分析  46-58
    3.4.1 Cef、Ap、Carb对小对叶离体叶片分化的影响  46-47
    3.4.2 Cef对农杆菌的抑制浓度  47-48
    3.4.3 筛选培养中选择压的确定  48-53
    3.4.4 遗传转化体系的建立  53-57
    3.4.5 转基因植株的检测  57-58
  3.5 讨论  58-61
    3.5.1 关于低转化率的问题  58-59
    3.5.2 PCR检测中出现的假阳性与假阴性  59-61
  3.6 本章小结  61-62
结论  62-64
参考文献  64-70
附录  70-71
在读期间发表的文章  71
在读期间参加的学术活动  71-74
图版  74-80
致谢  80

三种水草植株再生及遗传转化研究

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