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hOGG1基因变异与女性常见恶性肿瘤乳腺癌、卵巢癌易感性及其分子机制研究

作　者: 陈小祥
导　师: 王亚平
学　校: 南京大学
专　业: 内科学
关键词: 碱基切除修复 hOGG1基因 5’端非翻译区 年龄相关性疾病 8-羟基鸟嘌呤 启动子 乳腺癌 三阴性乳腺癌 上皮性卵巢癌 Ⅱ型卵巢癌 卵巢高级别浆液性乳头状囊腺癌 单核苷酸多态性 qRT-PCR 组织微阵列
分类号: R737.9
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


第一部分：hOGG1基因5’-UTR变异与乳腺癌易感性及其功能机制目的8-OHdG是细胞DNA氧化损伤产物之一,在DNA复制过程中将与腺嘌呤配对,诱发G：C到T：A颠换。hOGG1能够特异性切除和修复活性氧自由基引起的8-OHdG。本研究旨在探寻hOGG1基因5’-UTR变异与乳腺癌发病风险的关系。材料和方法病例-对照研究包括518例乳腺癌和777例健康女性。高分辨率溶解曲线结合序列分析的方法检测hOGG1基因5’-UTR变异；疾病分层分析寻找变异相关的乳腺癌亚群；免疫组织化学半定量方法分析5’-UTR变异对hOGG1蛋白表达的影响。结果本研究发现hOGG1基因5’-UTR存在5种变异。其中,c.-18G>T,c.-23A>G, c.-53G>C为已知的单核苷酸多态性。c.-45G>A和c.-63G>C为少见变异；乳腺癌组,c.-18G/T及c.-53G/C基因型频率高于对照组(p=0.03, OR=2.01,95%CI=1.04-3.90;及p=0.01,OR=2.43,95%CI=1.17-5.04)；c.-18G>T及c.-53G>C变异在绝经前期、三阴性乳腺癌亚型患者中检出频率更高(p<0.05)；c.-18G/T在低龄组(<55岁)及p53免疫组织化学染色阳性亚群更为多见(p=0.03,p=0.04)；携带c.-18G>T变异的癌旁正常乳腺组织中,hOGG1蛋白表达水平下降(p=0.01)。结论hOGG1基因5’-UTR的c.-18G>T、c.-53G>C变异增加乳腺癌发病风险,尤其增加绝经前期、三阴性乳腺癌亚群的易感性；c.-18G>T变异频率在相对低龄p53阳性乳腺癌亚群更高。第二部分：hOGG1基因变异与Ⅱ型卵巢癌罹患风险关系及其分子基础研究目的7,8-二氢,8-氧鸟嘌呤是一种氧化损伤的核苷,将诱发碱基错配并导致G→T突变。hOGG1蛋白是修复DNA配对双链中该异常核苷的关键酶。本研究目的是明确hOGG1基因变异是否增加上皮性卵巢癌的发病风险。材料和方法病例-对照研究包括420例上皮性卵巢癌和840例健康女性。HRM结合序列分析的方法检测hOGG1基因变异(c.-18G>T、c.-23A>G、 c.-45G>A、 c.-53G>C和c.977C>G)。免疫组织化学半定量方法和免疫印迹法分析5’-UTR功能性多态性变异(c.-18G>T)对hOGG1蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因系统检测c.-18G>T对启动子活性的影响。结果不同于Ⅰ型卵巢癌,Ⅱ型卵巢癌发病年龄高(54.5±8.5岁),分期较晚(>=Ⅱ期占95.5%),伴有p53免疫组织化学阳性高表达率(78.5%)。c.-18G/T和c.977G/G基因型频率在Ⅱ型卵巢癌较高(OR=2.83,95%CI=1.45-5.52; OR=1.66,95%CI=1.26-2.17),而Ⅰ型卵巢癌与对照相比未发现差异。携带c.-18G>T变异的卵巢癌旁正常卵巢组织中,hOGG1蛋白表达水平下降(p=0.01),荧光素酶报告基因检测表明,c.-18G>T变异可导致启动子活性下降达55%(p=0.001)结论hOGG1基因c.-18G>T和c.977C>G变异能增加Ⅱ型卵巢癌易感性；c.-18G>T变异降低启动子活性,影响hOGG1蛋白表达。第三部分：hOGG1基因表达水平与上皮性卵巢癌分型相关性研究目的探讨hOGG1基因mRNA及蛋白表达水平与上皮性卵巢癌分型是否存在相关性。材料和方法应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测32例卵巢高级别浆液性乳头状囊腺癌(HG-SPC)以及10例卵巢低级别浆液性乳头状囊腺癌(LG-SPC)组织及癌旁组织中hOGG1mRNA的表达；应用组织微阵列技术和免疫组织化学染色及半定量分析方法检测LG-SPC组织35例,HG-SPC组织120例hOGG1蛋白表达。结果卵巢浆液性乳头状囊腺癌组织与癌旁正常卵巢组织hOGG1mRNA表达水平无差异(p=0.95); HG-SPC与LG-SPC相比较,在癌组织与癌旁正常卵巢组织中,hOGG1mRNA表达水平均未发现差异(p=0.69；p=0.92)；在HG-SPC中,癌组织较对应癌旁正常卵巢组织hOGG1mRNA下降较LG-SPC中更为常见(分别62.5%、40.0%),但差异无显著性(p=0.21)；在HG-SPC与LG-SPC癌组织中,hOGG1蛋白表达水平无差异(p=0.19)结论不同类型卵巢浆液性乳头状囊腺癌组织及癌旁正常卵巢组织中,hOGG1基因表达水平均无差异；在卵巢高级别浆液性乳头状囊腺癌,癌组织较癌旁正常卵巢组织hOGG1mRNA表达下降更为常见。

全文目录


前言  4-5
中文摘要  5-8
ABSTRACT  8-14
第一章 绪论  14-19
  参考文献  17-19
第二章 hOGG1基因5’-UTR变异与乳腺癌易感性及其功能机制  19-44
  第一节 引言  19-20
  第二节 研究对象与方法  20-32
    1. 研究对象  20-22
    2. 主要仪器与试剂  22-23
    3. 基因组DNA提取  23
    4. hOGG1基因5’-UTR变异分析  23-29
    5. 5’-UTR变异对hOGG1基因功能影响的生物信息学预测  29
    6. 乳腺癌病理和免疫组织化学分析  29-30
    7. 5’-UTR变异对hOGG1蛋白表达的影响  30-32
    8. 统计学方法  32
  第三节 结果  32-38
    1. hOGG1基因5’-UTR变异乳腺癌病例-对照研究及临床病理特征分层分析  32-34
    2. hOGG1基因5’-UTR变异影响转录因子结合位点  34-35
    3. hOGG1基因5’-UTR变异影响乳腺癌组织hOGG1蛋白表达  35-38
  第四节 讨论  38-41
  参考文献  41-44
第三章 hOGG1基因变异与Ⅱ型卵巢癌罹患风险关系及其分子基础研究  44-77
  第一节 引言  44-45
  第二节 研究对象与方法  45-63
    1. 研究对象  45-46
    2. 主要仪器与试剂及溶液配置  46-51
    3. 基因组DNA提取  51
    4. hOGGl基因变异检测  51-52
    5. hOGGl基因变异病例-对照分析  52-53
    6. hOGG1基因5’-UTR的变异对蛋白表达的影响  53-56
    7. hOGG1基因5’-UTR的变异对启动子活性的影响  56-63
    8. 统计学方法  63
  第三节 结果  63-69
    1. 上皮性卵巢癌临床病理特征  63-64
    2. hOGG1基因变异与卵巢癌分型相关  64-65
    3. hOGG1基因5’-UTR变异影响卵巢癌hOGG1蛋白表达  65-68
    4. 5’-UTR变异影响启动子活性  68-69
  第四节 讨论  69-73
  参考文献  73-77
第四章 hOGGl基因表达水平与上皮性卵巢癌分型相关性研究  77-96
  第一节 引言  77-78
  第二节 材料与方法  78-85
    1. 研究对象  78-79
    2. 主要仪器与试剂  79-80
    3. 实验原理简介  80-81
    4. 实验方法  81-84
    5. 统计学方法  84-85
  第三节 结果  85-90
    1. qRT-PCR检测上皮性卵巢癌hOGG1mRNA表达  85-87
    2. 组织微阵列检测上皮性卵巢癌hOGG1蛋白表达  87-90
  第四节 讨论  90-93
  参考文献  93-96
第五章 结论  96-97
博士研究生期间发表的论文  97-98
文献综述(一) hOGG1基因与恶性肿瘤的相关性研究进展  98-110
  参考文献  106-110
文献综述(二) Ⅱ型卵巢癌的分子病理研究进展  110-123
  参考文献  119-123
致谢  123-124

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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