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水稻茎叶特异表达基因启动子的筛选及分析

作　者: 赖鹏程
导　师: 王锋
学　校: 福建师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 水稻 启动子 茎叶特异启动子
分类号: S511
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本研究在前期对水稻茎叶优势表达基因OsZF153和OsW8513启动子缺失功能分析的基础上,进一步探究这两个启动子的功能：一是对前期一系列缺失的OsZF153启动子转基因水稻植株验证,并构建一个3’端缺失长度为1407bp启动子的表达载体pCxgus-P153E和往5’端推100bp的启动子表达载体pCxgus-P153m;二是对前期缺失的一系列OsW8513启动子转基因植株验证,并构建两个表达载体pCxgus-P8513G和pCxgus-8513E。以上4个载体通过农杆菌介导转化日本晴水稻胚愈伤组织。对苗期、分蘖期、成熟期的转基因水稻植株的根、茎、叶、花、颖壳和种子各个器官进行GUS活性检测。通过生物信息学方法,在数据库筛选可能茎叶特异表达的启动子,然后用RT-PCR方法验证基因表达模式。对理想的候选sl2基因启动子和sl5基因启动子进行生物信息学分析,预测其主要的顺式作用元件,推测茎叶特异表达基因启动子可能具有的顺式作用元件。

全文目录


中文摘要  2-3Abstract  3-4中文文摘  4-6目录  6-9绪论  9-13第一章 植物启动子的研究现状  13-27  1 真核生物基因启动子的一般特点  13-14    1.1 核心启动子元件  13-14      1.1.1 TATA框  13      1.1.2 起始子  13-14    1.2 上游元件  14  2 植物基因启动子的分类  14-19    2.1 组成型启动子  15-16    2.2 诱导型启动子  16    2.3 组织特异型启动子  16-18    2.4 茎叶特异性表达启动子  18-19  3 启动子的克隆方法  19-21    3.1 利用PCR技术克隆启动子  19-20    3.2 利用启动子探针质粒载体筛选启动子  20    3.3 利用启动子捕获系筛选启动子  20-21  4 启动子功能和结构的研究策略  21-23  5 报告基因研究进展  23-25    5.1 β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)  23-24    5.2 氯霉素乙酰转移酶基因(cat)  24    5.3 荧光素酶基因  24    5.4 绿色荧光蛋白  24-25  6 本研究的技术路线  25-27第二章 水稻茎叶特异性表达启动子OsZF153P和OsW8513P的功能验证  27-39  1 前言  27  2 材料与方法  27-32    2.1 实验材料  27    2.2 主要试剂、质粒和菌株  27    2.3 主要仪器  27-28    2.4 引物  28    2.5 实验方法  28-32  3 结果与分析  32-35  4 新的缺失载体的构建及转化  35-39第三章 水稻茎叶特异基因启动子的筛选及表达模式分析  39-49  1 前言  39  2 材料与方法  39-42    2.1 实验材料  39    2.2 主要试剂  39-40    2.3 主要仪器  40    2.4 RT-PCR引物  40    2.5 实验方法  40-42  3 结果与分析  42-45    3.1 水稻茎叶特异基因启动子数据收集  42-43    3.2 候选基因表达分析  43-44    3.3 候选启动子序列生物信息学分析  44-45  4 讨论  45-49附录1 缩略词及英汉对照表  49-51附录2  51-53附录3 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒  53-55附录4 GUS染色液的配制  55-57附录5 TSS法制备感受态细菌  57-59附录6 启动子序列测序比对结果  59-67附录7 农杆菌介导水稻转化  67-69参考文献  69-77攻读学位期间承担的科研任务与主要成果  77-79致谢  79-81个人简历  81-82

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 禾谷类作物 > 稻
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