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TSA对克隆囊胚率的提高及同期发情的处理方法对胚胎移植的影响

作　者: 胡连东
导　师: 李煜；李喜和
学　校: 内蒙古大学
专　业: 生物工程
关键词: 组蛋白牛卵母细胞胚胎移植核移植曲古抑菌素A 重编程
分类号: Q813
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

实验以牛胎儿成纤维细胞作为供体核,以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植,用80nmol／L曲古抑菌素A(Trichostatin A, TSA)处理牛胎儿成纤维细胞12 h,以TSA处理后的牛胎儿成纤维细胞为供体细胞进行胚胎重构,重构完成后继续处理克隆胚胎0、6、12和24 h。应用激光共聚焦显微镜检测供体细胞组蛋白H4K12乙酰化水平,并通过核移植检测不同时间处理的克隆胚胎发育率。同时对不同同期发情方法对胚胎移植效果进行了比较,以寻找适合当地条件的同期发情方案。分别采用一次注射前列腺素(PG)、二次注射前列腺素(PG)、阴道埋植栓(CIDR)+前列腺素(PG)三种方法进行同期发情处理,并设自然发情组作胚胎移植效果比较。1、TSA处理12 h的供体细胞组蛋白H4K12乙酰化水平显著增高；2、80 nmol／LTSA处理12 h的克隆胚的囊胚发育率显著高于未处理组(21.9%vs 16.5%,p<0.05)；3、TSA处理24h的重构胚的各期发育率均很低,与对照组差异显著；TSA处理6 h的重构胚的囊胚发育率与对照组无显著差异；TSA处理细胞对细胞融合率没有影响。4、二次注射PG、CIDR+PG3、一次注射PG三种同期发情处理后的发情率分别为：74.70%、77.64%、71.19%,受体移植后的妊娠率鲜胚分达到52.12%、53.26%、50.44%,冻胚受胎率分别达到46.87%、41.44%、44.00%,这三组间差异不显著(P>0.05)。5、自然发情利用率达到85.71%,显著高于二次PG法注射同期处理组,选取自然发情牛作为受体显著提高胚胎移植成功率。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
第一章 TSA处理克隆胚对囊胚发育率的影响  9-14
  (一) 材料与方法  9-10
    1 材料  9
    2 方法  9-10
  (二) 结果  10-12
    1 TSA处理对体细胞组蛋白H4K12的乙酰化水平的影响  10-11
    2 TSA处理对克隆胚胎发育率的影响  11-12
  (三) 讨论  12
  参考文献  12-14
第二章同期发情不同处理方法对胚胎移植效果的影响  14-20
  (一) 材料和方法  14-17
    1 材料  14-15
    2 方法  15-17
  (二) 结果  17-18
    1 不同方法处理受体牛的同期发情效果  17
    2 自然发情与同期处理受体牛的胚胎移植效果比较  17-18
  (三) 讨论  18-19
  参考文献  19-20
第三章细胞核移植与奶牛繁殖技术的研究进展  20-51
  1 核移植的研究概述  20-22
  2 影响哺乳动物体细胞核移植成功率的主要因素  22-27
  3 哺乳供体核的重新编程的研究进展  27-32
  4 端粒酶和线粒体研究概述  32-33
  5 牛同期发情技术的研究概述  33-36
  6 牛超数排卵技术的研究概述  36-38
  7 牛胚胎移植技术研究简史  38-41
  参考文献  41-51
致谢  51-52
攻读学位期间已发表和待发表的学术论文  52

TSA对克隆囊胚率的提高及同期发情的处理方法对胚胎移植的影响

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