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组蛋白乙酰化增强转录因子Sp1诱导的mda-7基因转录激活

作　者: 潘虹
导　师: 黄百渠
学　校: 东北师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: HDAC4 HDAC抑制剂组蛋白乙酰化 mda-7 Sp1
分类号: R739.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

Mda-7/IL-24 (黑色素瘤分化相关基因/白介素-24)最早发现是作为一种细胞因子,在人外周血单核细胞(PBMC)中能够被PHA或LPS诱导表达。Mda-7基因定位于IL - 10相关基因的基因簇中,是一个Th1细胞促进因子。腺病毒介导的mda-7促进IL - 6和IFN -γ的表达,并诱导黑色素瘤细胞分泌干扰素-γ和IL - 6。除此之外,mda-7也是一种肿瘤抑制基因,在正常黑素细胞中组成性表达,以维持细胞的正常生理功能,并诱导细胞终末分化。但随着黑色素瘤的进程,其表达逐渐减少,在转移阶段基本检测不到。腺病毒介导的mda-7异位表达可以选择性地诱导肿瘤细胞大范围的凋亡而对正常细胞的的副作用很小。此外,有证据表明,肿瘤细胞中缺少mda-7的表达不是基因突变的结果,对比癌症和正常细胞没有发现基因结构改变。癌细胞中mda-7能够被诱导表达的事实表明可能有其他机制调控mda-7的表达。据推测,如组蛋白乙酰化修饰的表观遗传变化可能在mda-7的表达调控中发挥作用,但是还没有相关研究的报道。在本研究中,我们证明组蛋白去乙酰酶抑制剂TSA和NaBu能够激活mda-7的表达,组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)能够部分逆转这一作用。同时也发现HDAC4过表达后mda-7启动子处的组蛋白乙酰化水平降低并且抑制了转录因子Sp1与mda-7启动子的结合。另外,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA诱导组蛋白超乙酰化,促进Sp1与mda-7启动子结合,进而激活mda-7的表达。因此,我们得出结论组蛋白乙酰化修饰在调控mda-7表达中发挥重要作用,并且转录因子Sp1参与此过程。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-8
第一部分研究背景  8-18
  一、Mda-7 基因及其转录调控机制的研究进展  8-12
    （一）基因发现与命名  8-9
    （二）基因结构与表达  9
    （三）基因功能  9-12
  二、组蛋白乙酰化修饰与真核生物基因的转录调控  12-17
    （一）组蛋白去乙酰化酶（HDAC）与组蛋白乙酰转移酶（HAT）  12-13
    （二）组蛋白去乙酰化酶抑制剂  13-17
  三、本论文的内容及意义  17-18
    （一）立题依据  17
    （二）本文的研究内容和意义  17-18
第二部分实验材料与方法  18-27
  一、实验材料  18
    （一）质粒  18
    （二）蛋白质和抗体  18
    （三）哺乳动物细胞系  18
    （四）试剂  18
  二、实验方法  18-27
    Ⅰ. 生物信息学分析  19
    Ⅱ. 分子生物学实验方法  19-23
      （一）分子克隆  19
      （二） DNA 的琼脂糖电泳  19
      （三）质粒大量制备的方法  19-20
      （四）哺乳动物细胞总RNA 的提取  20-21
      （五）逆转录（Reverse Transcription ，RT）  21
      （六） PCR 和Real-time PCR  21-23
    Ⅲ. 细胞生物学实验方法  23-26
      （一）哺乳动物细胞系的培养  23
      （二）真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测  23
      （三）蛋白质的Western Blotting 分析  23-24
      （四）染色质免疫沉淀实验（Chromatin immunoprecipitation ，ChIP）  24-26
    Ⅳ. 统计分析  26-27
第三部分实验结果与分析  27-34
  一、HDAC 抑制剂激活mda-7 的表达  27-28
  二、转录因子Sp1 诱导mda-7 表达，HDAC4 部分逆转这一作用  28-31
  三、HDAC 抑制剂TSA 通过提高mda-7 启动子处的乙酰化水平激活mda-7 的表达  31-34
第四部分讨论  34-36
结论  36-37
参考文献  37-44
致谢  44-45
在学期间公开发表论文及著作情况  45

组蛋白乙酰化增强转录因子Sp1诱导的mda-7基因转录激活

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