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Wnt/β-catenin通路在脉冲强磁场促神经干细胞增殖中的作用初探

作　者: 龙兴蓝
导　师: 许涛
学　校: 华中科技大学
专　业: 康复医学与理疗学
关键词: 神经干细胞 RNAi β-catenin 慢病毒 MOI 脉冲强磁场 增殖 wnt/β-catenin通路
分类号: R329.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：比较β-catenin shRNA1、β-catenin shRNA2两种慢病毒载体抑制神经干细胞β-catenin表达效果。方法：1、神经干细胞的获得：取新生SD大鼠双侧侧脑室下的神经干细胞，用无血清培养基培养14天。2、构建β-catenin shRNA1、β-catenin shRNA2两种慢病毒载体及阴性病毒载体。3、神经干细胞预转染：将神经干细胞分为β-cateninshRNA1病毒转染组、β-catenin shRNA2病毒转染组和阴性病毒转染组3组，计算各组转染效率，初步确定转染条件。4、根据预转染结果，分别用Real Time PCR和Western Blot方法检测MOI=5时神经干细胞中β-catenin的表达水平。结果：1、神经干细胞预转染时，在低MOI时，β-catenin shRNA1、β-catenin shRNA2及阴性对照病毒转染率分别为83.89±10.8%、72.92±20.8%、78.48±18.1%，各组细胞间转染率无统计学差异（p＞0.05）。2、在MOI=5时，β-catenin shRNA1组的β-catenin mRNA水平与空白组比较减少了63.56%，β-catenin shRNA2则减少了38.63%（p＜0.05）。3、两组的蛋白表达减少，其中β-catenin shRNA1的β-catenin蛋白减少最明显（p＜0.05）。结论：在MOI=5时，β-catenin shRNA1慢病毒载体抑制神经干细胞中β-catenin表达效果最好。目的：比较β-catenin shRNA1慢病毒载体在不同MOI时抑制神经干细胞中β-catenin表达的效果。方法：1、神经干细胞的获得：取新生SD大鼠双侧侧脑室下的神经干细胞，用无血清培养基培养14天。2、β-catenin shRNA1慢病毒在MOI=0、0.1、1、10时，用Real Time PCR和Western Blot方法检测神经干细胞中β-catenin的表达水平。结果：1、在MOI=0.1、1、10时，和MOI=0时比较，β-catenin mRNA的表达均有不同程度的减少，存在差异（p＜0.05），其中以MOI=10时，减少最明显，与MOI=0时相比减少了71.21%。2、当MOI=0.1、1、10时，神经干细胞β-catenin蛋白表达减少。其中当MOI=10时，β-catenin蛋白减少最明显（p＜0.05）。结论：1、β-catenin shRNA1在MOI=10时，对神经干细胞中β-catenin的抑制效果最好。2、确定MOI=10为最佳转染浓度，用β-catenin shRNA1慢病毒转染神经干细胞，能获得抑制β-catenin表达的神经干细胞进行后续实验。目的：利用抑制了β-catenin表达的神经干细胞，初步探讨wnt/β-catenin通路在脉冲强磁场促神经干细胞增殖中的作用。方法：1、神经干细胞的获得：取新生SD大鼠双侧侧脑室下的神经干细胞，用无血清培养基培养14天。2、用β-catenin shRNA1慢病毒，在MOI=10时转染神经干细胞，即第二部分中获得的抑制了β-catenin表达的神经干细胞作为实验组。3、将阴性组（阴性病毒转染组）和实验组（β-catenin shRNA1慢病毒转染组）神经干细胞分别用4T、0.1Hz、8次的脉冲强磁场干预。4、在用脉冲强磁场干预后的1天、7天，采用CCK8法检测阴性组和实验组的神经干细胞增殖情况。结果：阴性病毒组在脉冲强磁场干预后1天、7天神经干细胞增殖最明显，而实验组在干预前后细胞增殖水平无明显变化（p＜0.05）。结论：经RNAi法抑制了wnt/β-catenin通路表达的神经干细胞，没有呈现出脉冲强磁场的促增殖现象，提示wnt/β-catenin通路在脉冲强磁场促神经干细胞增殖中起作用。

全文目录


背景  5-7
第一部分 β-catenin shRNA1、2 两种慢病毒载体抑制神经干细胞中 β-catenin 表达效果比较  7-21
  摘要  7-8
  Abstract  8-9
  前言  9-10
  实验材料和方法  10-14
  结果  14-19
  讨论  19-20
  结论  20-21
第二部分 β-catenin shRNA1 慢病毒载体抑制神经干细胞中 β-catenin 表达的浓度效应  21-29
  摘要  21-22
  Abstract  22-23
  前言  23-24
  材料和方法  24-25
  结果  25-27
  讨论  27-28
  结论  28-29
第三部分 wnt/β-catenin 通路在脉冲强磁场促神经干细胞增殖中的作用初探  29-40
  摘要  29-30
  Abstract  30-31
  前言  31-33
  材料和方法  33-35
  结果  35-36
  讨论  36-39
  结论  39-40
参考文献  40-45
附图  45-46
综述  46-57
  参考文献  53-57
英文缩略词索引  57-58
致谢  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学 > 人体细胞学
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