学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

异丙威影响神经发育主要细胞的迁移分化及突起生长的体外研究

作　者: 柴小玉
导　师: 王取南
学　校: 安徽医科大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 异丙威小鼠神经干细胞迁移分化突起生长
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 3次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的以体外培养的小鼠胚胎神经干细胞(mNSC)、大鼠C6神经胶质瘤细胞和人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞作为神经干细胞、神经胶质细胞和神经元研究模型,研究异丙威对分化中的神经干细胞(NSC)、C6和SH-SY5Y细胞的毒性作用以及细胞迁移、分化和突起生长的影响,初步探讨异丙威的神经发育毒性及可能的细胞机制。方法以5、25、50、100 mg/L异丙威对诱导分化中的mNSC、C6和SH-SY5Y神经细胞染毒,同时设立培养液空白对照和溶剂对照,通过四噻氮唑盐(MTT)比色法和细胞活性/毒性染色法(LIVE/DEAD)测定染毒24 h和/或48 h后的细胞毒性,并采用免疫荧光细胞化学的方法分析mNSC的迁移与分化,考马斯亮蓝染色法分析C6和SH-SY5Y细胞突起生长状况。统计学处理:SPSS11.0 for windows软件包建立数据库并进行统计分析结果MTT法测分化中mNSC的细胞毒性:在50 mg/L异丙威作用24h和48h后,分化中mNSC表现出明显的细胞毒性,随着异丙威浓度的升高,细胞存活率降低,且呈剂量依赖性(24 h,rs=-0.820,48h,rs=-0.950;均P<0.01);MTT和LIVE/DEAD两种方法测分化中的C6和SH-SY5Y细胞的细胞毒性:结果一致,处理48 h后,50 mg/L异丙威对分化中的SH-SY5Y细胞引起明显的细胞毒性,而在100 mg/L剂量下,分化中的C6细胞存活率的下降才有显著性差异。随着异丙威浓度的升高,这两种细胞的细胞毒性增大,且呈剂量效应关系(C6: MTT,rs=-0.862;LIVE/DEAD,rs=0.818;SH-SY5Y:MTT,rs=-0.796 ;LIVE/DEAD,rs=0.906;均P<0.05)。免疫荧光细胞化学结果显示,25 mg/L异丙威已明显抑制神经干细胞的迁移(P<0.01),随着异丙威浓度浓度的升高,mNSC迁移面积和迁移距离均下降,且呈剂量依赖性(Aa/Ab,rs=-0.998;Dm/Db,rs=-0.995;均P<0.01);随着异丙威浓度的升高,mNSC分化出的GFAP和Tuj阳性细胞率下降,呈剂量依赖性(rs=-0.900,rs=-0.984,均P<0.05),在50 mg/L剂量时GFAP和Tuj阳性细胞率分别下降了8.34%±1.78%和1.97%±0.35%,且存在明显的差异(P<0.05),实验还观察到25mg/L剂量下,GFAP阳性细胞突起减少,Tuj阳性细胞突起缩短,至100mg/L,这种现象更加明显。考马斯亮蓝染色结果显示,50 mg/L异丙威已抑制C6突起延伸细胞率,而25 mg/L剂量就抑制了SH-SY5Y突起延伸细胞率。随着异丙威浓度的升高,这两种细胞的突起延伸细胞率均下降,且呈剂量效应关系(C6,rs=-0.806;SH-SY5Y,rs=-0.975;均P<0.01)。结论在不引起明显细胞毒性的前提条件下,异丙威能抑制mNSC的迁移,同时也能抑制其向星形胶质细胞和神经元分化,且向星形胶质细胞分化的抑制作用尤为明显;异丙威还能抑制胶质细胞(C6)和神经元(SH-SY5Y)的突起生长。异丙威干扰了神经系统发育的关键事件(细胞的迁移、分化及突起生长),这提示异丙威可能具有一定的神经发育毒性。

全文目录

英文缩略词表 5-6中文摘要 6-8英文摘要 8-101. 前言 10-132. 材料与方法 13-21 2.1 材料 13-14 2.2 方法 14-20 2.3 图像获取及测量及数据处理 20-213. 结果 21-34 3.1 异丙威对细胞存活的影响 21-24 3.2 异丙威对mNSC的影响 24-32 3.3 异丙威对C6 和SH-SY5Y 细胞突起生长的影响 32-344. 讨论 34-375. 结论 37-386. 参考文献 38-42个人简介 42-44 一、个人基本情况 42 二、主要学习及工作经历 42 三、在校期间教学实践与社会实践 42 四、在读期间参与的课题研究 42-43 五、在校期间发表的论文 43-44致谢 44-45综述 45-56 参考文献 52-56

异丙威影响神经发育主要细胞的迁移分化及突起生长的体外研究

内容摘要

全文目录

相似论文