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Neuroglobin在视网膜中的表达及其保护视网膜缺血缺氧损伤分子机制的研究

作　者: 李中秋
导　师: 张晓光
学　校: 吉林大学
专　业: 眼科学
关键词: neuroglobin 蛋白表达视网膜缺血缺氧损伤 Na~+,K~+-ATPaseβ2亚基免疫共沉淀
分类号: R774.1
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

本研究通过RT-PCR及western blotting等方法检测到在大鼠视网膜组织、高原鼠兔视网膜组织、人视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50,70细胞、大鼠视网膜神经元中neuroglobin的表达。通过建立沙鼠视网膜缺血缺氧损伤模型,检测到neuroglobin在视网膜组织中的表达量发生明显的变化。Neuroglobin mRNA的表达呈现时相性的变化:沙鼠视网膜缺血5-10min时表达达到高峰,发挥明显上调作用。在酵母双杂交筛出Na+,K+-ATPaseβ2亚基是与neuroglobin发生相互作用的蛋白质的前期工作基础上,本实验获得了GST-Na+,K+-ATPaseβ2亚基-CT的原核表达产物。通过免疫家兔,成功得到Na+,K+-ATPaseβ2亚基的多克隆抗体,并予以充分鉴定。检测到在上述视网膜组织及相关细胞中也同样存在Na+,K+-ATPaseβ2亚基的表达。进而,通过免疫共沉淀实验进一步检测到二者生理状态下是以复合体的形式存在,从而充分证明了二者在视网膜中相互作用的可靠性。为明确neuroglobin保护视网膜耐受缺氧损伤的分子机制奠定重要的基础。

全文目录

英文缩略词表  8-9
前言  9-13
主要仪器设备  13-14
第一章 Neuroglobin 在视网膜组织及相关细胞中的表达分析  14-30
  第一节逆转录多聚酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR) 检测neuroglobin 在不同种属视网膜及人视网膜母细胞瘤细胞中的表达  14-21
  第二节蛋白免疫印迹法检测neuroglobin 在大鼠视网膜中的表达  21-23
  第三节视网膜神经元的分离和培养  23-26
  第四节蛋白免疫印迹法检测大鼠视网膜神经元的neuroglobin 表达  26-27
  第五节讨论  27-30
第二章视网膜缺血缺氧损伤中neuroglobin 的上调作用  30-39
  第一节视网膜缺血缺氧模型的构建  30-31
  第二节 Neuroglobin 在视网膜缺血缺氧不同时间点的表达变化  31-34
  第三节逆转录多聚酶链反应半定量分析视网膜缺血缺氧条件下neuroglobin 的表达上调作用  34-35
  第四节讨论  35-39
第三章 Neuroglobin 相关蛋白－Na~~+,K~+-ATPase β2 亚基的分子研究  39-51
  第一节 Na~+,K~+-ATPase β2 亚基原核表达及多克隆抗体的制备  40-43
  第二节 Na~+,K~+-ATPase β2 亚基多克隆抗体特异性的鉴定  43-44
  第三节 Na~+,K~+-ATPase β2 亚基在视网膜组织及相关细胞中的表达  44-48
  第四节讨论  48-51
第四章 Neuroglobin 与Na~+,K~+-ATPase β2 亚基生理条件下在视网膜组织中相互作用的研究  51-57
  第一节免疫共沉淀实验证实neuroglobin 与Na~+,K~+-ATPase β2 亚基相互作用  51-53
  第二节讨论  53-57
结论  57-59
附录一主要溶液的配制  59-64
附录二分子克隆相关方法  64-69
附录三蛋白质相关操作  69-74
参考文献  74-78
攻读博士期间发表的学术论文及其它成果  78-79
摘要  79-84
Abstract  84-91
致谢  91

Neuroglobin在视网膜中的表达及其保护视网膜缺血缺氧损伤分子机制的研究

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