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雌激素介导ERα调控子宫内膜间质细胞β-catenin表达的分子机制及在子宫内膜异位症形成和发展中的意义
作 者: 于岚
导 师: 刘义
学 校: 华中科技大学
专 业: 妇产科学
关键词: Wnt/β-catenin信号通路 子宫内膜间质细胞(ESC) siRNA 侵袭实验 子宫内膜异位症 17β-雌二醇(17β-E2) Lef-1/Tcf-3 免疫共沉淀 激光共聚焦
分类号: R711.71
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的:体外分离培养子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞,并探讨雌激素介导ERα调控β-catenin的表达对及其影响子宫内膜异位症的发生发展的机制。方法:取正常人子宫内膜,体外分离培养子宫内膜间质细胞(ESC)并传代培养,实验一,用不同浓度的17β-雌二醇(0,10-12,10-10,10-8,10-6 mol/L)处理ESC,同法同时加入雌激素受体拮抗剂ICI182.780,用RT-PCR和Wsetern blot检测每组β-catenin mRNA和蛋白的表达变化;实验二,选择10-8 mol/L 17β-雌二醇处理ESC后,同时设一组17β-雌二醇+ICI182.780处理ESC,观察其相对空白组ESC侵袭能力的变化;另设一组,β-catenin siRNA转染ESC后,与阴性转染对照组和空白对照组同时用10-8 mol/L 17β-雌二醇处理,观察其与阴性对照组和空白对照组ESC细胞侵袭性的变化;实验三,激光共聚焦技术检测空白组和10-8 mol/L 17β-雌二醇处理48h组ESC中ERα和β-catenin相对Lef-1/Tcf-3的位置关系;用10-8mol/L 17β-E2分别刺激ESC不同时间(0h,12h,24h,48h),免疫共沉淀方法(CoIP)检测不同时间雌激素刺激ESC后ERα和β-catenin相对Lef-1/Tcf-3的相互作用及表达变化。结果:一,17β-雌二醇体外能明显促进正常子宫内膜间质细胞(ESC)β-catenin mRNA和蛋白的表达,并且呈剂量依赖性,于10-8 mol/L作用时最明显,这一作用能够被雌激素受体拮抗剂ICI182.178所阻断;二,17β-雌二醇处理ESC细胞后能明显增强其侵袭性,但这一作用可以被雌激素受体拮抗剂ICI182.780抑制,同时,以β-catenin siRNA转染17β-雌二醇处理的ESC沉默β-catenin的表达也能拮抗雌激素造成的ESC侵袭能力的增加;三,激光共聚焦结果显示ERα和Lef-1/Tcf-3,β-catenin和Lef-1/Tcf-3有相重叠的位置关系,在雌激素刺激后表达增加并且向细胞核内聚集;免疫共沉淀结果表明,ERα和Lef-1/Tcf-3,β-catenin和Lef-1/Tcf-3存在蛋白的相互作用,并且雌激素刺激ESC时间越长,ERα和β-catenin蛋白表达也越高,相应的Lef-1,Tcf-3的蛋白也显示有所增高。结论:雌激素可能通过ERα介导Wnt/β-catenin信号通路激活,通过Lef-1/Tcf-3激活的下游靶基因转录进而影响子宫内膜异位症的发生发展。
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全文目录
中英文缩略词表 5-7 摘要 7-9 Abstract 9-11 前言 11-15 材料与方法 15-19 实验一 19-28 结果 25-28 实验二 28-32 结果 30-32 实验三 32-40 结果 35-40 讨论 40-44 结论 44-48 综述 48-64 参考文献 57-64 附录1 硕士期间发表论文 64-65 致谢 65
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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 妇科学 > 女性生殖器其他疾病 > 子宫内膜异位症
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