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氮肥运筹对转基因棉Bt蛋白表达与降解的调控作用

作　者: 张顺
导　师: 马宗斌
学　校: 河南农业大学
专　业: 作物栽培学与耕作学
关键词: 氮肥运筹 Bt蛋白表达与降解氮代谢生理活性衰老初步机理
分类号: S562
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本文以转单价基因抗虫杂交棉中棉72为实验材料,采用不同的施氮量和施氮方式处理,系统研究了氮肥运筹对转基因棉叶片和棉铃中Bt蛋白的表达与降解的调控作用及其初步机理,氮肥运筹对棉蕾中Bt含量、叶片中氮代谢生理活性及衰老的影响,主要研究结果如下:1氮肥运筹对抗虫棉叶片中Bt蛋白表达与降解的调控随着棉花叶片的生长发育,Bt蛋白的含量呈现先上升后下降的趋势,至功能期时达到高峰,衰老期和脱落期时含量明显下降。不同的施氮量处理和施氮方式处理对抗虫棉叶片中Bt蛋白的表达与降解均具有明显的调控作用。就施氮量处理而言,随着氮肥施入量的加大,叶片中Bt蛋白的含量整体呈现增大趋势,但当氮肥施入量过大时,叶片中Bt蛋白含量反而会下降。前期表达量较多的处理后期残留量也较多。对施氮方式处理来说,不施底肥会严重影响前期叶片中Bt蛋白的表达;施入较多的盖顶肥时,Bt蛋白的降解速度缓慢,后期叶片中残留的Bt蛋白含量较高。2氮肥运筹对转基因棉棉铃中Bt蛋白表达与降解的调控随着棉铃的发育,铃壳中Bt蛋白含量呈现出先增大后减小的趋势,充实期时含量最高,棉铃吐絮时迅速下降。而棉籽中Bt蛋白含量却逐渐增加,吐絮期时各处理棉籽中含量达到最高峰。不同的施氮量处理对棉铃各器官中Bt蛋白的表达和降解具有一定的调控作用。随着施氮量的加大,铃壳、棉纤维和棉籽中的Bt蛋白含量整体呈增大趋势,前期表达较多的处理后期残留也较多。棉铃各器官中Bt蛋白的表达和降解也受到不同施氮方式的影响。在膨大期和充实期,B3处理棉铃各器官中Bt蛋白的含量总体高于其他处理;在吐絮期时,盖顶肥施入最多的B1处理棉铃各器官中Bt蛋白降解的速度较慢,残留量最高,未施盖顶肥的B4处理棉铃各器官中Bt蛋白的含量最低。3氮肥运筹对抗虫棉叶片氮代谢生理活性的影响不同的施氮量处理显著影响了抗虫棉叶片中的氮代谢生理活性,随着氮肥施入量的加大,叶片中的游离氨基酸、可溶性蛋白和全氮的含量整体呈增加趋势,提高了谷氨酰胺合成酶(GS)的活性,叶片中的氮代谢生理活性随之增强。抗虫棉叶片中的氮代谢生理活性也受到了不同施氮方式处理的影响,叶片中的游离氨基酸、可溶性蛋白和全氮的含量以及谷氨酰胺合成酶(GS)的活性在展开期时以施入底肥最多的B4处理的含量最高,在衰老期、脱落期时均以施入盖顶肥最多的B1处理含量最高,这说明施入一定量的盖顶肥能够显著增强抗虫棉叶片在后期时的氮代谢的生理活性。4氮肥运筹对抗虫棉叶片衰老的影响对不同氮肥处理的叶片中的丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及叶绿素的含量进行了测定,结果表明随着氮肥施入的增多,降低了各个时期的叶片中的丙二醛(MDA)的含量,增强了超氧化物歧化酶(SOD)的活性,提高了叶绿素的含量,进而延缓了叶片的衰老进程。就施氮方式处理而言,底肥和花铃肥施入较多的处理在叶片的展开期和功能期时的丙二醛(MDA)的含量较低,超氧化物歧化酶(SOD)的活性较高,叶绿素的含量也较其他处理高。在叶片的衰老期和脱落期,盖顶肥施入较多的处理丙二醛(MDA)的含量低于其他处理,超氧化物歧化酶(SOD)的活性仍较高,叶绿素的降解速度也低于其他处理,这说明对抗虫棉及时补施盖顶肥能够防止棉株因缺肥而早衰,延缓叶片的衰老。5氮肥运筹对抗虫棉叶片中Bt蛋白表达与降解调控的初步机理就施氮量处理而言,增施氮肥总体上促进了抗虫棉叶片在展开期、功能期、衰老期和脱落期的谷氨酰胺合成酶(GS)活性的增强,游离氨基酸、可溶性蛋白质的合成和全氮含量增加。同时也促进了棉花叶片中的Bt蛋白合成,导致叶片生育前期Bt蛋白表达量增加,在生育后期残留量也较大。对施氮方式处理来说,底肥和花铃肥施入较多的B4处理,促进了抗虫棉叶片在展开期时谷氨酰胺合成酶(GS)活性的增强,游离氨基酸、可溶性蛋白质的合成和全氮含量增加,其合成的Bt蛋白量也增加。盖顶肥施入较多的B1处理在衰老期、脱落期时谷氨酰胺合成酶(GS)活性仍较高,游离氨基酸、可溶性蛋白质和全氮含量也比其他处理高,叶片中残留的Bt蛋白含量最高。

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致谢 4-7摘要 7-91 文献综述 9-15 1.1 转Bt 基因棉在棉花生产中的重要作用 9 1.2 Bt 蛋白及其杀虫机理 9-10 1.2.1 Bt 简介 9 1.2.2 Bt 蛋白的杀虫机理 9-10 1.3 转Bt 棉在生产中存在的一些主要问题 10-12 1.3.1 转基因棉Bt 蛋白表达不稳定 10-11 1.3.1.1 转基因棉Bt 蛋白的表达具有时空变异性 10 1.3.1.2 转基因棉Bt 蛋白的表达易受外界环境的影响 10-11 1.3.2 转基因棉的Bt 蛋白对生态及人畜存在潜在风险 11-12 1.3.2.1 转基因棉的Bt 蛋白对土壤生态系统的影响 11 1.3.2.2 转基因棉的Bt 蛋白对非靶标害虫的影响 11-12 1.3.2.3 转基因棉花的副产品对食品生产的影响 12 1.4 化学调控对转基因棉Bt 蛋白含量的影响 12-13 1.5 施氮量对转基因棉Bt 蛋白含量的影响 13-152 引言 15-17 2.1 立题依据 15-16 2.2 技术路线 16-173 材料与方法 17-21 3.1 试验设计 17 3.2 测定项目与方法 17-21 3.2.1 氮代谢生理活性的测定 17-19 3.2.1.1 游离氨基酸含量的测定 17-18 3.2.1.2 可溶性蛋白含量的测定 18 3.2.1.3 GS 活性的测定 18-19 3.2.2 衰老相关酶活性的测定 19-21 3.2.2.1 超氧化物歧化酶（SOD） 19 3.2.2.2 丙二醛（MDA）含量的测定 19-20 3.2.2.3 叶绿素含量的测定 20-214 结果与分析 21-33 4.1 氮肥运筹对抗虫棉Bt 蛋白表达与降解的调控 21-23 4.1.1 氮肥运筹对抗虫棉叶片中Bt 蛋白表达与降解的调控 21 4.1.2 氮肥运筹对抗虫棉蕾中Bt 蛋白含量的调控 21-22 4.1.3 氮肥运筹对抗虫棉棉铃不同器官中Bt 蛋白表达与降解的调控 22-23 4.2 氮肥运筹对抗虫棉叶片氮代谢生理活性的影响 23-27 4.2.1 氮肥运筹对抗虫棉叶片中游离氨基酸含量的影响 23-24 4.2.2 氮肥运筹对抗虫棉叶片中可溶性蛋白含量的影响 24-25 4.2.3 氮肥运筹对抗虫棉叶片中全氮含量的影响 25-26 4.2.4 氮肥运筹对抗虫棉叶片中谷氨酰胺合成酶（GS）活性的影响 26-27 4.3 氮肥运筹对抗虫棉叶片衰老的影响 27-29 4.3.1 氮肥运筹对抗虫棉叶片中丙二醛（MDA）含量的影响 27-28 4.3.2 氮肥运筹对抗虫棉叶片中超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响 28 4.3.3 氮肥运筹对抗虫棉叶片中叶绿素含量的影响 28-29 4.4 氮肥运筹对抗虫棉大田指标的影响 29-32 4.4.1 氮肥运筹对抗虫棉叶面积指数的影响 29-31 4.4.2 氮肥运筹对抗虫棉干物质积累的影响 31-32 4.5 抗虫棉叶片中Bt 蛋白含量与氮代谢生理活性的相关分析 32-335 结论与讨论 33-37 5.1 氮肥运筹对抗虫棉叶片中Bt 蛋白表达与降解的影响 33 5.2 氮肥运筹对抗虫棉蕾中Bt 蛋白含量的影响 33-34 5.3 氮肥运筹对抗虫棉棉铃中Bt 蛋白表达与降解的影响 34 5.4 氮素对抗虫棉叶片中Bt 蛋白表达与降解影响的初步机理 34-35 5.5 氮肥运筹对抗虫棉叶片衰老的影响 35 5.6 有关抗虫杂交棉施氮的建议 35-37参考文献 37-44ABSTRACT 44-46

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