学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

产单核细胞李氏杆菌actA/plcB双缺失突变株的构建

作　者: 刘瑾
导　师: 姚火春；王恒安
学　校: 南京农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 产单核细胞李氏杆菌 actA/plcB双缺失 嵌合抗原856A2 胞外蛋白表达
分类号: S852.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 7次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


本试验依据国家标准(GB/T 4789.30-2008)从市售肉、蛋、乳制品及部分水产品中共分离鉴定了38株产单核细胞李氏杆菌。多重PCR将此38株分离株的血清型分为3类,其中34株为1/2a & 3a,3株为1/2c & 3c,1株为1/2b、3b & 7。38株分离菌对30种抗生素中的大多数抗生素敏感。13株在comK基因位点携带有原噬菌体,16株在tRNAArg基因位点携带有原噬菌体,丝裂霉素C诱导及透射电镜观察证实获得了一株溶源性噬菌体。12株分离株的溶血试验结果显示均具有较强的溶血活性。选取以上实验得到的HA1069,该菌株溶血能力较强、对各种常用抗生素敏感且不含有原噬菌体,测定其prfA基因群核苷酸序列,在此基础上设计引物,SOE-PCR扩增同源重组交换臂,并克隆至大肠杆菌-李氏杆菌温敏型穿梭质粒pKSV7,得actAlplcB双缺失同源重组质粒pK1013；以电转化方式将质粒pK1013导入菌株HA1069感受态细胞,经抗生素抗性和温度敏感筛选后,PCR检测确认获得一株actAlplcB双缺失突变株。以结核分枝杆菌嵌合抗原856A2为外源基因,通过基因切割、SOE-PCR等将编码856A2蛋白的基因片段与hly基因的启动子连接,定向克隆到pKSV7载体上,并电转化至actAlplcB双缺失突变株感受态细胞,PCR检测结果表明重组质粒转化成功。Western-blot显示作为阳性对照的大肠杆菌表达856A2有清晰条带,而重组李氏杆菌培养上清未显示有条带,可能是由于李氏杆菌胞外表达蛋白产量很少而不足以检测。

全文目录


摘要  6-7ABSTRACT  7-8第一章 产单核细胞李氏杆菌毒力因子研究进展  8-26  1 产单核细胞李氏杆菌的感染及细胞间扩散  8-10  2 主要毒力因子  10-19    2.1 主要的内化素蛋白  10-14    2.2 溶血素蛋白LLO  14-15    2.3 PI-PLC和PC-PLC  15    2.4 ActA及胞内运动相关毒力因子  15-18    2.5 自溶素Auto  18-19  3 总结  19-20  参考文献  20-26第二章 产单核细胞李氏杆菌的分离与鉴定  26-40  1 材料与方法  27-31    1.1 样品的采集及细菌分离  27    1.2 hly基因的PCR鉴定  27-28    1.3 清型鉴定  28-29    1.4 溶血性实验  29    1.5 噬菌体诱导  29-30    1.6 药敏试验  30-31  2 结果  31-35    2.1 分菌及鉴定  31    2.2 多重PCR鉴定血清型  31-32    2.3 溶血性实验  32    2.4 噬菌体的诱导及电镜负染色观察  32-34    2.5 药敏试验结果  34-35  3 讨论  35-37  参考文献  37-40第三章 产单核细胞李氏杆菌HA1069actA/plcB基因缺失株的构建与鉴定  40-54  1 材料和方法  40-48    1.1 质粒与菌株  40-41    1.2 prfA Regulon序列的测定  41-42    1.3 actA/plcB基因缺失质粒pK1013的构建  42-46    1.4 电转化及缺失株的鉴定  46-48  2 结果  48-51    2.1 prfA Regulon的序列分析  48-49    2.2 pK1013质粒的构建  49-50    2.3 产单核李氏杆菌actA/plcB基因缺失株的鉴定  50-51  3 讨论  51-52  参考文献  52-54第四章 actA/plcB缺失株表达结核分枝杆菌嵌合抗原856A2  54-64  1 材料和方法  54-59    1.1 实验材料  54    1.2 856A_2蛋白的大肠杆菌表达与纯化  54-56    1.3 抗血清制备  56    1.4 产单核李氏杆菌表达856A_2蛋白  56-59  2 结果  59-61    2.1 856A2蛋白的大肠杆菌表达与纯化  59-60    2.2 pKh856载体的构建  60-61    2.3 胞外蛋白表达及检测  61  3 讨论  61-62  参考文献  62-64全文总结  64-66致谢  66

相似论文

  1. 芽孢杆菌胞外高丰度蛋白的分离测序和表达元件的克隆分析,Q78
  2. 羊种布鲁氏菌16M优势蛋白抗原的鉴定,S852.61
  3. 禽致病性大肠杆菌鸭源分离株侵袭相关基因致病机理研究,S852.61
  4. 61株鸭源鸡杆菌部分耐药基因及其与耐药性关系的研究,S852.61
  5. 济宁地区鸡源致病性大肠杆菌分离鉴定与耐药性分析,S852.61
  6. FTH1在B.ovis 019株侵染小鼠巨噬细胞中的功能研究,S852.61
  7. 重庆市猪源大肠杆菌对β-内酰胺类药物耐药性的研究,S852.61
  8. 鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测,S852.61
  9. 牛源大肠杆菌耐药性及耐药机制研究,S852.61
  10. 黑龙江省部分地区鹅大肠杆菌的分离鉴定,S852.61
  11. 猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及其核酸疫苗的初步研究,S852.61
  12. 表达两种不同血清型的鸭大肠杆菌融合株的构建及其免疫原性的研究,S852.61
  13. 禽病原性大肠杆菌E516株与尿道致病性大肠杆菌U56株毒力基因相关性与体内外表达差异的研究,S852.61
  14. 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌cya、crp双基因缺失突变株的构建及其相关功能性分析,S852.61
  15. 多杀性巴氏杆菌跨膜蛋白基因的选择克隆,S852.61
  16. 金黄色葡萄球菌TRAP与无乳链球菌SIP蛋白融合表达及免疫保护作用,S852.61
  17. 嗜水气单胞菌Ⅲ型分泌系统基因的克隆表达及密度感应系统对其调控作用,S852.61
  18. 羊种布鲁氏菌强毒株16M与疫苗株M5差异蛋白质组学分析,S852.61
  19. 四川省食品动物源性大肠杆菌耐药性监测及整合子—基因盒检测,S852.61
  20. 副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其外膜蛋白D15的免疫原性研究,S852.61

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 病原细菌
© 2012 www.xueweilunwen.com