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原儿茶酸体外抗HBV作用机制的研究

作　者: 张家臣
导　师: 陈勇
学　校: 湖北大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 乙肝病毒原儿茶酸拉米夫定启动子信号通路
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 42次
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内容摘要

原儿茶酸有明显抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。研究表明原儿茶酸(PA)与拉米夫定(3TC)的联合用药能明显增强对HBV的抑制作用,且能更好的抑制HBV中X蛋白的入核。但目前为止,未曾见PA抗HBV的相关分子作用机制研究的报道。本文主要研究了原儿茶酸体外抗HBV的相关分子作用机制。人肝癌细胞Huh7分别转染HBV-S1P, HBV-S2P, HBV-CP, HBV-XP, HBV-FP(含两个增强子)的启动子-荧光报告基因质粒后,分别与药物作用一定时间,测定各组荧光值,分析药物对五种HBV基因启动子活性的影响,探讨药物抗HBV的分子机制。其次从信号通路角度研究药物对相关信号通路PGL3-NF-kB和PGL3-AP-1启动子水平的影响来探讨药物抗HBV病毒复制与信号通路之间的相关性。结果显示不同浓度的原儿茶酸对HBV启动子均有不同程度的抑制作用。原儿茶酸对FP启动子的抑制作用呈现倒U型,当PA浓度为1μg/mL时,抑制作用最大。原儿茶酸对其他四个启动子的抑制呈现剂量依赖关系。10μg/mL PA和10μg/mL 3TC对启动子的影响实验,显示联合用药对XP的抑制为59.5%,单药PA对XP的抑制率为37.8%。原儿茶酸对信号通路的启动子AP-1和NF-K B也有抑制作用且呈现剂量依赖关系,当PA浓度达到10μg/mL时,抑制作用达到最大,其中AP-1的抑制率达到66.4%；NF-K B的抑制率达到31.2%。实验结果说明,原儿茶酸对HBV启动子及信号通路的启动子的抑制,是该药物抑制HBV复制的重要途径之一,为进一步动物实验乃至应用于临床提供了理论基础和实验依据。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-9
1. 文献综述  9-21
  1.1 HBV的形态结构及理化性质  9
  1.2 HBV的分子生物学特征  9-10
  1.3 HBV的复制  10-15
  1.4 HBV病毒感染的细胞模型  15-16
  1.5 乙型肝炎的治疗  16-21
    1.5.1 拉米夫定抗HBV的现状  17-18
    1.5.2 原儿茶酸抗HBV的现状  18-20
    1.5.3 抗HBV的联合治疗  20-21
2. 实验材料和细胞培养  21-25
  2.1 细胞模型和质粒  21
  2.2 试剂准备及仪器  21-23
    2.2.1 药物配制  21
    2.2.2 实验试剂  21
    2.2.3 溶液配制  21-23
  2.3 细胞培养  23-25
    2.3.1 细胞传代  23-24
    2.3.2 细胞冻存  24
    2.3.3 细胞复苏  24-25
3. 药物浓度筛选  25-27
  3.1 实验目的  25
  3.2 实验方法  25
    3.2.1 实验分组  25
    3.2.2 药物对Huh7细胞毒性的检测  25
  3.3 实验结果与讨论  25-27
4. 原儿茶酸对HBV启动子的调控作用研究  27-34
  4.1 实验目的  27
  4.2 实验方法  27-30
    4.2.1 实验分组  27
    4.2.2 药物对HBV启动子的调控作用  27-30
  4.3 实验结果  30-32
  4.4 分析与讨论  32-34
5. 原儿茶酸对NF-κB和A P-1表达的影响  34-38
  5.1 实验目的  34-35
  5.2 实验方法  35-36
    5.2.1 实验分组  35
    5.2.2 药物对NF-κB和A P-1表达的影响  35-36
  5.3 实验结果  36
  5.4 分析与讨论  36-38
参考文献  38-43
致谢  43

原儿茶酸体外抗HBV作用机制的研究

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