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维甲酸诱导腭裂小鼠出生前后Wnt通路相关信号分子的表达

作 者: 吴慧
导 师: 肖晶
学 校: 大连医科大学
专 业: 口腔基础医学
关键词: 维甲酸 腭裂 Wnt信号通路 动物模型
分类号: R782.21
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


背景:维甲酸诱导腭裂小鼠是探讨基因与环境相互作用导致先天性腭裂发生的常用且可靠动物模型之一。维甲酸功能是通过与其膜上受体结合,经细胞浆内的维甲酸结合蛋白运输到核内与相应受体结合,最终通过基因转录调控来实现的,Wnt、Shh和BMP等信号分子通路中的重要基因都被证明参与到维甲酸致腭裂的发病过程中,维甲酸导致腭裂的机制是直接影响神经嵴细胞(颌面部突起的起源)的游走和增殖,主要通过干扰DNA合成而抑制腭突间充质细胞的增殖,与Wnt5a, Shh, BMP-4和FGF-10等大多数基因敲除小鼠的腭裂表现型和发生机制相似。目的:验证本课题组前期完成的维甲酸诱导腭裂小鼠腭组织全基因组筛选中获得的Wnt信号分子通路相关基因GSK-3β、Fzd3和β-TrCP,观察其在正常腭突发育和腭裂形成出生前后表达变化。探讨维甲酸诱导腭裂小鼠出生后对Wnt通路的影响。方法:按照100 mg/kg体重管饲ICR小鼠维甲酸建立小鼠腭裂模型。在无菌环境下将E18(embryo day18,E18)的胎鼠和出生后PN0(postnatal day 0, PN0)的幼鼠,于体式显微镜底下取出腭组织。应用SYBR? GreenⅠ实时定量PCR技术及免疫组织化学方法检测GSK-3β,Fzd3及β-TrCP的表达水平与部位。结果:1、出生前后GSK-3β,Fzd3及β-TrCP基因表达水平改变GSK-3β及Fzd3在出生前后均有表达,PN0期表达均高于E18期,其中RA组具有统计学意义(P<0.05),WT组无统计学差异(P >0.05);β-TrCP在出生前后均有表达,其中WT组有统计学意义(P<0.05),RA组有变化但无统计学差异(P >0.05)。在E18期RA组和WT组的GSK-3β与Fzd3表达水平无显著性差异(P >0.05),而β-TrCP在RA组表达水平下调,有统计学意义(P<0.05);在PN0期RA组的GSK-3β、Fzd3和β-TrCP表达水平均高于WT组,具有统计学差异(P<0.05)。2、在出生后GSK-3β、Fzd3和β-TrCP蛋白分布PN0期的免疫组织化学结果显示正常组中GSK-3β、Fzd3和β-TrCP蛋白表达在腭突上皮,口腔侧腭上皮表达水平较强,在腭间充质中GSK-3β和Fzd3无表达,β-TrCP呈弱表达。实验组中GSK-3β、Fzd3和β-TrCP蛋白强表达在腭突上皮上,尤其是腭中嵴及口腔侧上皮表达水平更强,在腭间充质中GSK-3β、Fzd3和β-TrCP较强。结论:本研究结果表明在出生后维甲酸诱导腭裂小鼠腭上皮中GSK-3β、Fzd3和β-TrCP等Wnt通路抑制因子表达水平上调,提示了维甲酸可能通过调控上述基因而对Wnt信号分子通路的活化具有抑制作用。

全文目录


摘要  6-8Abstract  8-10前言  10-13材料和方法  13-17结果  17-21讨论  21-24结论  24-25参考文献  25-28综述  28-37  参考文献  34-37附录  37-38致谢  38

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中图分类: > 医药、卫生 > 口腔科学 > 口腔颌面部外科学 > 口腔颌面部整形外科学 > 唇裂及其修复术
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