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B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇细胞中的表达与纯化

作　者: 郑瑾
导　师: 林建银；林旭
学　校: 福建医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 基因型 HBx 表达果蝇 S2细胞
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的:在果蝇表达系统中表达并获得高纯度的B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)。方法: PCR扩增获得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因(分别为Xb及Xc),以AgeI及BglII位点将其克隆入果蝇表达载体pMT/BiP/V5/HisC,构建相应的重组表达载体。重组载体与筛选质粒pCoBlast以脂质体Cellfectine共转染果蝇S2细胞,25μg/ml Blasticidin筛选获得多克隆抗性细胞株。扩增细胞并以CuSO4诱导HBx蛋白表达,Western-Blot鉴定表达产物并确定最佳的蛋白表达时间和诱导浓度。大规模培养细胞并诱导表达,用两种方法纯化获得高纯度的B、C基因型HBx。结果: 1、成功构建了B、C基因型乙型肝炎病毒X基因的重组质粒pMT/BiP-Xb-His C和pMT/BiP-Xc-His C;2、获得稳定表达HBx融合蛋白的S2细胞株,确定了融合蛋白在S2细胞中表达的最佳时间是诱导后72h,适宜的CuSO4诱导浓度为500μM～1mM;3、获得纯度为84.59%和94.62%的HBx融合蛋白。结论: B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇表达系统中成功表达,经大规模表达纯化获得高纯度的融合蛋白,为进一步探讨B、C基因型HBx结构和功能差异奠定了基础。

全文目录

英文缩略语  3-4
中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
正文  6-28
  前言  6-8
  材料与方法  8-22
    一材料  8-9
    二方法  9-22
      (一) pMT/BiP-Xb-His C 和pMT/BiP-Xc-His C 质粒的构建  9-14
      (二) 52细胞的转染及抗性多克隆细胞株的筛选  14-17
      (三) HBx 融合蛋白在52 细胞中的表达与分析  17-19
      (四) HBx 融合蛋白大规模表达和纯化  19-22
  结果  22-28
    一 pMT/BiP-Xb-His C 和pMT/BiP- Xc -His C 重组质粒的构建及鉴定  22-23
    二 HBx 融合蛋白表达分析  23-25
    三 HBx 融合蛋白的大规模表达和纯化  25-28
小结  28-29
讨论  29-32
参考文献  32-34
致谢  34-35
综述  35-48
  参考文献  43-48

B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇细胞中的表达与纯化

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