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家蚕生物反应器研究

作　者: 何泽
导　师: 曹广力；贡成良
学　校: 苏州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 转基因蚕生物反应器 PiggyBAC 转座子杆状病毒
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 261次
引　用: 1次
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内容摘要

桑蚕生物反应器主要有两种形式;转基因桑蚕(transgenic silkworm)和杆状病毒表达载体系统(Baculovirus Expression Vector System,BEVS)。我们将由家蚕核型多角体病毒(BmNPV)IE-1 基因启动子及其控制下的hGM_CSF 基因克隆到PigA3GFP 中,构建了家蚕转基因载体PigA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将此载体与其辅助质粒helper-pigA3 导入家蚕,获得了发绿色荧光的家蚕。提取家蚕基因组DNA 用PCR 法可检测hGM-CSF 基因,推测hGM—CSF 基因已整合进家蚕的染色体,对G3 代转基因家蚕用ELISA 进行hGM-CSF 的活性测定,结果表明转基因家蚕冻干粉中hGM-CSF 的量为95ng/100mg。另外,我们将SARS 病毒的M 蛋白完整基因克隆进原核表达载体pET28a(+), 在大肠杆菌BL21 中诱导表达,分析表明大肠杆菌中表达的重组M 蛋白的分子量为28KD,与理论值相符,此外还有一条分子量为18kDa 左右的条带,推测与大肠杆菌密码子的偏爱性或表达产物的降解有关;同时将M 蛋白基因克隆到杆状病毒转移载体pBacPAK-His 中,用BEVS 表达了M 蛋白。SDS-PAGE、Western Blotting 分析表明,而用杆状病毒表达的重组M 蛋白的分子量为30KDa 比理论值25.96KDa 高,推测与表达产物的翻译后加工如糖基化有关。

全文目录

引言  6-8
第一部分文献综述  8-48
  第一章桑蚕生物反应器研究进展  8-30
    第一节桑蚕生物反应器的主要用途  8-18
    第二节桑蚕生物反应器生产的外源蛋白  18-30
  第二章冠状病毒与 SAR.S 研究进展  30-48
    第一节冠状病毒概  30-36
    第二节 SARS 冠状病毒及研究进展  36-48
第二部分正文  48-86
  第三章一般材料和分子克隆常用方法  48-60
  第四章 piggyBAC 转座子转hGM-CSF 基因家蚕研究  60-71
  第五章 SARS 病毒 M 蛋白在 E.coli 和家蚕中的表达研究  71-86
附录一各章的图表及质粒图谱  86-89
附录二符号说明(英汉双解缩略词表)  89-90
附录三在校期间发表的论文及申请专利  90-91
致谢  91-92
苏州大学硕士学位论文详细摘要  92-94

家蚕生物反应器研究

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