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人CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA MBL基因突变体在哺乳细胞中的表达及产物分析

作　者: 刘凤玲
导　师: 陈政良
学　校: 第一军医大学
专　业: 免疫学
关键词: 甘露聚糖结合凝集素野生型突变型表达 CHO细胞 COS7细胞
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)系哺乳动物C型凝集素超家族中胶凝素家族的成员,是主要由肝细胞分泌的血浆糖蛋白。作为天然免疫系统的重要成份,MBL是补体凝集素激活途径的启动因子。近年来,越来越多的研究表明,各种病原体的反复感染与MBL缺损密切相关。人MBL基因位于染色体10q11.2-q21。现已发现3个可导致血清(浆)MBL水平低下并进而引起调理吞噬缺损的MBL结构基因点突变:CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA,其编码产物的改变分别是Arg(精氨酸)→Cys(半胱氨酸)、Gly(甘氨酸)→Asp(天冬氨酸)及Gly(甘氨酸)→Glu(谷氨酸)。这些点突变为常染色体共显性遗传,其基因频率在不同种族人群中差异甚大,但总体来说极高,如第52位密码突变在所研究过的人群中相对较低(≤0.1),第54位密码突变在欧亚人群中有较高频率(0.11～0.14),而第57位密码突变在撒哈拉非洲人群中的频率很高(0.23～0.29)。显然,MBL缺损是迄今所发现的最常见的免疫缺损病。因此,阐明MBL基因突变引起免疫缺损的机理具有极其重要的意义。然而,目前尚不清楚MBL基因突变导致血清(浆)MBL水平低下的直接原因,究竟是分泌减少还是结构不稳定?为了深入研究MBL基因突变引起免疫缺损的分子机制,并进一步阐明MBL的结构与功能的关系,我们选择CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA MBL突变体基因作为研究对象,将其在哺乳动物细胞中表达,并对瞬时表达和稳定表达的蛋白产物进行了初步分析。一、抗人MBL抗原肽多克隆抗体的制备与鉴定在对天然MBL分子优势表位预测的基础上,合成B细胞识别表位15 mer短肽NH2-EPGQGLRGLQGPPGK-COOH,将其与载体蛋白KLH偶联后免疫新西兰大白兔。经ELISA法检测抗体滴度为1:128 000。采用抗原肽亲和层析纯化法获得抗人MBL抗原肽多克隆抗体MSA(MBL specific-epitope antibody),其

全文目录

摘要  3-6
ABSTRACT  6-10
前言  10-12
第1章抗人MBL抗原肽多克隆抗体的制备与鉴定  12-18
  1.1 材料与方法  12-14
  1.2 结果  14-16
  1.3 讨论  16-18
第2章突变型和野生型MBL基因在COS7细胞中的瞬时表达  18-30
  2.1 材料与方法  18-24
  2.2 结果  24-27
  2.3 讨论  27-30
第3章突变型MBL基因在CHO细胞中的表达及产物分析  30-46
  3.1 材料与方法  30-38
  3.2 结果  38-42
  3.3 讨论  42-46
全文小结  46-47
参考文献  47-51
英文缩略词表  51-53
攻读学位期间成果  53-54
致谢  54-55
第一军医大学学位论文原创性声明  55
学位论文版权使用授权书  55

人CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA MBL基因突变体在哺乳细胞中的表达及产物分析

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