学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

番鸭呼肠孤病毒S组基因序列分析及衣壳蛋白克隆表达

作　者: 王劭
导　师: 吴宝成；陈化兰
学　校: 福建农林大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 番鸭 呼肠孤病毒 基因 序列分析 表达
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 122次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


禽(番鸭)呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, DRV)是新近发现的番鸭“肝白点病或花肝病”的病原。该病的主要临床特征是精神萎顿、软脚、排绿色带有粘液稀粪、部分病鸭趾关节或跗关节有不同程度的肿胀及耐过鸭生长发育受阻;主要病理变化为肝、脾表面有多量小白点、肾脏肿大、出血、表面有黄色条斑。在患病番鸭中,雏番鸭最为易感,死亡率很高。禽源呼肠孤病毒(Avianreovirus, ARV)经常以抗原亚型存在,不易确定独立的血清型。病毒基因组中的4个小基因节段(S1、S2、S3和S4)是研究ARV遗传演化的关键,已发现ARV分离株S组基因具有两种基因型:一种基因型的代表株为DRV-89026和DRV-89330,另一种基因型的代表株为ARV-S1133。本实验室从番鸭“肝白点病”患鸭的肝脾匀浆中分离到7个病毒分离株,通过病毒病的常规实验诊断证实均为DRV。为了进一步了解DRV福建分离株的遗传演化关系,本研究选取番鸭源原代株YB和克隆株YJL、传代株YH进行病毒4个小基因节段(S组)基因节段序列测定与分析。 本研究从GeneBank中读取法国分离株DRV-89026和DRV-89330,美国分离株ARV-S1133和176的S组全基因序列设计两套PCR引物,利用番鸭胚成纤维细胞增殖番鸭源呼肠孤病毒,提取病毒基因组RNA,用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)对这三株病毒4个基因节段进行扩增,其产物克隆进入pMD18-T载体后,在CEQ8000测序仪上进行序列测定,成功获得YJL和YB的S组全基因序列,YH的S1和S3基因序列。结果表明克隆测定的基因节段均包含完整的开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)。原代株YBS1、S2、S3和S4基因大小分别为1324bp、1201bp、1191bp和1191bp,克隆株YJL的S1、S2、S3和S4基因大小分别为1643bp、1324bp、1179bp和1192bp,传代株YH的S1和S3基因大小分别为1643bp和1179bp。另外,这三株病毒S组基因系统发生树表明,DRV-YH与YJL同为一个亚系,但与DRV-YB亲源关系较远,分属不同的进化分支。

全文目录


中文摘要  8-10
英文摘要  10-12
第一部分 引言  12-16
第二部分 禽(番鸭)呼肠孤病毒株S组基因序列分析  16-46
  材料与方法  16-22
    1 材料  16-18
      1.1 病毒  16
      1.2 非免疫番鸭胚  16
      1.3 主要试剂  16
      1.4 溶液配制  16-17
      1.5 引物  17-18
      1.6 主要仪器  18
    2 方法  18-22
      2.1 病毒的增殖及RNA的提取  18
      2.2 病毒RNA反转录和PCR扩增  18-19
      2.3 PCR产物的回收与纯化  19
      2.4 PCR产物的克隆  19-20
      2.5 DRV-S组基因节段的序列测定  20-21
      2.6 DRV-S组基因节段测序结果的联机检索分析  21
      2.7 DRV-S组基因节段cDNA核苷酸、推导的氨基酸序列的比较及系统发生树的绘制  21-22
  结果与分析  22-41
    1 RT-PCR扩增结果  22-23
      1.1 对YH和YJL的S组基因的RT-PCR扩增结果  22
        1.1.1 YH和YJL-S1基因的RT-PCR扩增  22
        1.1.2 YJL-S2基因的RT-PCR扩增  22
        1.1.3 YH和YJL-S3基因的RT-PCR扩增  22
        1.1.4 YJL-S4基因的RT-PCR扩增  22
      1.2 对YB的S组基因的RT-PCR扩增结果  22-23
        1.2.1 YB-S1基因的RT-PCR扩增  22
        1.2.2 YB-S2基因的RT-PCR扩增  22
        1.2.3 YB-S3基因的RT-PCR扩增  22
        1.2.4 YB-S4基因的RT-PCR扩增  22-23
    2 YH、YJL和YB的S组基因的阳性质粒PCR鉴定  23-28
      2.1 YH和YJL的S组基因的阳性质粒PCR鉴定  23
        2.1.1 YH和YJL-S1基因的阳性质粒PCR鉴定  23
        2.1.2 YJL-S2基因的阳性质粒PCR鉴定  23
        2.1.3 YH和YJL-S3基因的阳性质粒鉴定  23
        2.1.4 YJL-S4基因的阳性质粒PCR鉴定  23
      2.2 YB的S组基因的阳性质粒PCR鉴定  23-28
        2.2.1 YB-S1基因的阳性质粒PCR鉴定  23
        2.2.2 YB-S2基因的阳性质粒PCR鉴定  23-24
        2.2.3 YB-S3基因的阳性质粒PCR鉴定  24
        2.2.4 YB-S4基因的阳性质粒PCR鉴定  24-28
    3 cDNA的序列测定  28-30
      3.1 YH和YJL的S组基因cDNA的序列测定  28-29
        3.1.1 YH、YJL-S1基因的序列测定  28
        3.1.2 YJL-S2基因的序列测定  28
        3.1.3 YH、YJL-S3基因的序列测定  28-29
        3.1.4 YJL-S4基因的序列测定  29
      3.2 YB的S组基因cDNA的序列测定  29-30
        3.2.1 YB-S1基因的序列测定  29
        3.2.2 YB-S2基因的序列测定  29
        3.2.3 YB-S3基因的序列测定  29
        3.2.4 YB-S4基因的序列测定  29-30
    4 测序结果的联机检索  30
    5 DRV核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析  30-37
      5.1 编码σA蛋白的基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析  30
      5.2 编码σNS蛋白的基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析  30-31
      5.3 编码σB蛋白的基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析  31
      5.4 具有多顺反子基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析  31-37
        5.4.1 YH、YJL-S1基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析  31-32
        5.4.2 YB-S4基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析  32-37
    6 DRV-S组基因系统发生树的建立  37-41
      6.1 编码σA蛋白的基因系统发生树的建立  37
      6.2 编码σNS蛋白的基因系统发生树的建立  37
      6.3 编码σB蛋白的基因系统发生树的建立  37-38
      6.4 编码σC蛋白的基因系统发生树的建立  38-41
  讨论  41-46
    1 YJL、YH-S1和YB-S4基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较  41-43
    2 YJL-S4和YB-S2基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较  43-44
    3 YJL-S2和YB-S1基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较  44-45
    4 YH，YJL和YB-S3基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较  45-46
第三部分 DRV-YB株的S3与S40RF2基因的原核表达  46-57
  材料与方法  46-53
    1 材料  46-48
      1.1 病毒  46
      1.2 主要试剂  46-47
      1.3 溶液配制  47
      1.4 引物  47-48
      1.5 主要仪器  48
    2 方法  48-53
      2.1 病毒增殖  48
      2.2 病毒RNA的提取和PCR扩增  48
      2.3 PCR产物的回收、克隆及鉴定  48
      2.4 目的基因的原核表达  48-51
      2.5 表达产物σB和σC蛋白的生物学活性检测  51-53
  结果与分析  53-57
    1 对YB的S3和S40RF2基因RT-PCR扩增结果  53
      1.1 YB-S40RF2基因的RT-PCR扩增  53
      1.2 YB-S3基因的RT-PCR扩增  53
    2 YB的S3和S40RF2基因阳性质粒PCR鉴定  53-54
      2.1 YB-S40RF2基因的阳性质粒PCR鉴定  53
      2.2 YB-S3基因的阳性质粒PCR鉴定  53-54
    3 表达产物SDS-PAGE分析和Western-blotting分析  54-56
      3.1 诱导表达蛋白的分析  54-55
      3.2 表达产物的Western-blotting检测  55-56
    4 蛋白胶薄层扫描分析重组表达蛋白  56-57
讨论  57-59
结论  59-60
参考文献  60-64
附录  64-74
致谢  74-75
作者简介  75

相似论文

  1. 基因调控网络模型描述语言研究,Q78
  2. 多转录因子组合调控研究,Q78
  3. 高校艺术教学建筑设计研究,TU244.3
  4. 时间表达式识别与归一化研究,TP391.1
  5. 生物医学领域检索系统查询扩展技术研究,TP391.3
  6. 拟南芥胱硫醚-γ-合成酶（D-AtCGS）基因在大肠杆菌中的表达及抗血清制备,Q943.2
  7. 红肉脐橙和‘国庆四号’温州蜜柑中CHS和CHI基因的克隆与表达及其对类黄酮积累的调控机制,S666.4
  8. 拟南芥热激因子HSFA1d响应甲醛胁迫的作用研究,Q945.78
  9. hBMP4和hBMP7在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究,Q78
  10. 南极冰藻GPx、GST和SAHH基因的克隆、定量分析及原核表达载体的构建,Q943.2
  11. 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
  12. 草鱼呼肠孤病毒vp6和ns38基因的克隆、表达及VP6和NS38免疫原性研究,S941.41
  13. 天然来源的抗衰老先导化合物的化学结构及作用机理研究,R285.5
  14. Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
  15. 缺血性脑血管病患者CYP2C19基因多态性分析,R743
  16. BMP通路关键因子在人类牙胚组织中的表达检测,R78
  17. 《庄子》修辞策略探析,B223.5
  18. 夏季湖光岩玛珥湖浮游细菌和浮游活性菌遗传多样性的比较,Q938
  19. Gsα的过表达和缺失对果蝇大脑发育的影响,Q75
  20. 基于RNA测序技术的马氏珠母贝珍珠囊转录组及数字基因表达谱分析,Q786
  21. 铝胁迫下小黑豆的红外光谱特征分析及其铝胁迫响应基因的鉴定,S529

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 家畜病毒学
© 2012 www.xueweilunwen.com