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新疆杨原生质体培养及体细胞染色体加倍初探

作　者: 白姗姗
导　师: 康向阳
学　校: 北京林业大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: 新疆杨 原生质体 培养 不定芽 多倍体
分类号: S792.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 62次
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内容摘要


本研究以新疆杨(Populus alba L.var. pyramidalis.)为材料,在建立无菌快繁体系的基础上,利用组培苗茎段诱导愈伤组织,进而就不同起始材料原生质体分离、纯化技术进行了探讨,并初步开展了原生质体培养和体细胞染色体加倍技术的研究。主要结果如下：1.在建立新疆杨无菌苗组培快繁体系的基础上,开展了愈伤组织培养研究,发现以新疆杨同一无菌苗植株不同部位为材料,其愈伤组织诱导率均为100%；愈伤组织诱导的适宜培养基为1/2MS+2,4-D 3.0mg/L；经过2-4次继代的愈伤组织由色泽浅黄而鲜艳的小颗粒组成,生长速度较快。2.以新疆杨组培苗叶片、愈伤组织为材料,进行了原生质体游离、纯化技术研究,结果表明,新疆杨不同起始材料的原生质体游离最适酶液组合不同,叶片采用1.0%Cellulase R-10+0.5%Macerozyme R-10+1.0%Hemicellulase+1.0% Pectolase Y-23;愈伤组织采用2.0%Cellulase R-10+1.0%Macerozyme R-10+ 1.0%Pectolase Y-23。在添加600mg/L MES.1g/L牛血清蛋白、pH值5.8的条件下酶解8h,可获得较高产量和活力的原生质体。起始材料和取材时间对新疆杨原生质体产量和活力有显著影响,其中采用继代30d的无菌苗第2-4片叶片的原生质体产量最高,达到1.5×107个/g·FW,活力为81.6%；采用继代2-4次后生长20d左右的愈伤组织材料能获得8.50×106个/g·FW的产量,活力达81.2%；新疆杨原生质体纯化以上浮法蔗糖等密度离心最好,纯净原生质体产量为2.20x106个/g·FW,活力保持在83.6%。3.初步开展了新疆杨原生质体培养研究,试验了不同基本培养基、不同激素配比、不同培养方法等对新疆杨原生质体培养的影响,发现在2.5×105/ml培养密度下,采用KM8p+ 2,4-D 3.0mg/L+ZT 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+NAA0.5 mg/L+MES 600mg/L+牛血清蛋白1g/L+CH 500mg/L+谷氨酰胺200 mg/L+天门冬氨酸150mg/L+0.6mol/L葡萄糖等培养基培养有细胞分裂启动迹象,但未获得愈伤组织和再生植株。4.对叶片不定芽进行了染色体加倍研究,在筛选出1/2MS+BA 0.25mg/L +IAA0.25mg/L+TDZ 0.01 mg/L为叶片不定芽诱导最佳培养基的基础上,采用秋水仙碱溶液处理离体叶片并诱导不定芽分化,在预培养8d后,用500mg/L秋水仙碱溶液处理12h的组合观察到一定数量的形态变异植株,并利用形态学观察后对疑似植株进行了流式细胞仪鉴定,未发现多倍体。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
引言  9-12
1 文献综述  12-23
  1.1 植物原生质体分离与培养  12-19
    1.1.1 原生质体分离  12-15
    1.1.2 原生质体培养  15-17
    1.1.3 原生质体培养的应用  17-18
    1.1.4 问题与展望  18-19
  1.2 林木体细胞染色体加倍研究进展  19-23
    1.2.1 秋水仙碱诱导体细胞染色体加倍及诱导材料的选择  19-20
    1.2.2 植物多倍体的鉴定  20-21
    1.2.3 问题与展望  21-23
2 试验材料与方法  23-29
  2.1 试验材料  23
  2.2 新疆杨无菌苗快繁  23
    2.2.1 材料采集及表面灭菌  23
    2.2.2 深灭菌  23
    2.2.3 接种培养  23
  2.3 新疆杨愈伤组织诱导  23-24
    2.3.1 愈伤组织诱导  23-24
    2.3.2 愈伤组织培养  24
  2.4 新疆杨原生质体的游离  24-26
    2.4.1 叶片原生质体的游离  24
    2.4.2 叶片原生质体酶解时间、酶解温度和渗透压的筛选  24
    2.4.3 愈伤组织原生质体的游离  24-25
    2.4.4 愈伤组织酶解时间和渗透压浓度的筛选  25
    2.4.5 原生质体的纯化  25
    2.4.6 原生质体产量和活力测定  25-26
  2.5 新疆杨原生质体培养  26-27
  2.6 新疆杨叶片不定芽诱导与加倍处理  27-29
    2.6.1 新疆杨叶片不定芽诱导  27
    2.6.2 秋水仙碱处理浓度筛选  27
    2.6.3 秋水仙碱处理时间筛选  27-28
    2.6.4 再生植株的形态学和倍性鉴定  28
    2.6.5 数据处理  28-29
3 结果与分析  29-46
  3.1 新疆杨叶片原生质体的游离  29-34
    3.1.1 叶片原生质体游离酶种及其浓度的筛选  29-31
    3.1.2 预处理对叶片原生质体游离的影响  31-32
    3.1.3 酶解时间对叶片原生质体游离的影响  32-33
    3.1.4 甘露醇浓度对新疆杨叶片原生质体分离的影响  33
    3.1.5 酶解温度对新疆杨叶片原生质体分离的影响  33-34
    3.1.6 原生质体的纯化  34
  3.2 新疆杨愈伤组织原生质体的游离  34-39
    3.2.1 愈伤组织诱导及愈伤组织培养  34-35
    3.2.2 愈伤组织原生质体游离  35-39
  3.3 新疆杨原生质体培养  39-42
    3.3.1 新疆杨叶片原生质体培养  39-42
    3.3.2 新疆杨愈伤组织原生质体培养  42
  3.4 秋水仙碱诱导新疆杨叶片不定芽染色体加倍初探  42-46
    3.4.1 新疆杨叶片不定芽诱导培养基的筛选  43-44
    3.4.2 秋水仙碱处理诱导新疆杨叶片不定芽染色体加倍  44-45
    3.4.3 新疆杨叶片不定芽再生植株的倍性鉴定  45-46
4 讨论  46-51
  4.1 新疆杨原生质体游离与纯化  46-47
  4.2 新疆杨原生质体培养  47-49
  4.3 新疆杨叶片不定芽染色体加倍  49-51
5 结论  51-53
参考文献  53-60
图版  60-63
个人简介  63-64
导师简介  64-65
成果清单  65-66
致谢  66

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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 森林树种 > 阔叶乔木 > 杨
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