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水稻及拟南芥神经酰胺基因的克隆及突变体的鉴定

作　者: 李俭
导　师: 姚楠
学　校: 中山大学
专　业: 生物技术
关键词: 拟南芥鞘脂原生质体神经酰胺神经酰胺酶
分类号: S511
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

鞘脂(sphingolipids)除了作为真核生物中膜结构的重要组成成分外,它还能作为重要的信号分子调节细胞的增值、分化和死亡。但是目前对植物鞘脂的了解还十分有限。其核心代谢产物神经酰胺在鞘脂代谢途径中具有决定性的作用,神经酰胺酶能水解神经酰胺中脂肪酸与鞘氨醇之间的连接键,并生成鞘氨醇和脂肪酸。水稻是一种重要的粮食作物,对于水稻鞘脂代谢相关基因的研究,具有重要的理论与应用价值。本论文首先克隆了水稻神经酰胺酶基因的全长,然后用两种农杆菌介导的水稻愈伤转化法获得水稻神经酰胺酶过表达,RNAi转基因植株,为后续对该基因功能的研究提供了良好的实验材料。同时,由于拟南芥有3个神经酰胺酶同源基因,因此我们在ABRC购买了其突变体,经鉴定后,两两杂交获得拟南芥神经酰胺酶基因的双突变纯合体,在此基础上再次杂交、筛选,最后获得神经酰胺酶基因的三突变纯合体,即Atcdases。此外,我们还用C2-神经酰胺处理了拟南芥神经酰胺酶单突变体,检测了细胞活性,发现C2-神经酰胺能明显促进Atcdase-2的原生质体死亡,而另外两种单突变体相对野生型拟南芥无明显差异,推测AtCDase-2是拟南芥中关键的神经酰胺酶,它的突变导致拟南芥中神经酰胺水平的变化,从而对外源添加的神经酰胺更加敏感。

全文目录

摘要 3-4ABSTRACT 4-7第一章前言 7-12 1.1 鞘脂概述 7-8 1.2 鞘脂与植物细胞程序性死亡 8 1.3 植物鞘脂功能简介 8-9 1.4 神经酰胺酶研究进展概述 9-10 1.5 本课题的意义和技术路线 10-12第二章实验材料和方法 12-31 2.1 实验材料 12 2.2 实验常用的试剂 12 2.3 常用的菌种和载体 12 2.4 试剂配制 12-20 2.5 实验中所用的PCR 引物 20 2.6 实验方法 20-27 2.7.P CR 反应 27-31第三章结果与分析 31-50 3.1 水稻神经酰胺酶基因的克隆及农杆菌介导的水稻转化 31-37 3.2 拟南芥神经酰胺酶突变体的鉴定 37-50第四章讨论 50-53 4.1 水稻神经酰胺酶的克隆和农杆菌介导的水稻愈伤的转化 50-51 4.2 拟南芥神经酰胺酶基因突变纯合体的鉴定及其功能的初步分析 51-53结论和展望 53-55参考文献 55-62附录一：单壁碳纳米管注射拟南芥植株后ROS 相关基因表达水平检测 62-63附录二：OsCERK 和修饰过的OsCERK 对酵母生长的影响 63-64附录三：硕士期间发表论文 64-65致谢 65

水稻及拟南芥神经酰胺基因的克隆及突变体的鉴定

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