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NYD-SP15生物学功能研究及FEN对成年ICR小鼠精子质量及获能率的影响

作　者: 毕焕京
导　师: 李建民
学　校: 南京医科大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 胞苷脱氨酶 NYD-SP15 细胞周期亚细胞定位 RNA干扰精子获能率内分泌干扰物氰戊菊酯计算机辅助精子分析
分类号: Q954.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景&目的:近年来关于胞苷脱氨酶家族基因的研究报告络绎不绝,许多该家族成员在肿瘤发生、肿瘤耐药、机体免疫和抗病毒感染等生物活动中行使重要作用。NYD-SP15是我们发现的具有胞苷脱氨酶结构域的新基因,对其功能的研究具有开创性的意义。本研究通过对NYD-SP15生物体内胞苷脱氨酶活性、在不同细胞周期中的亚细胞定位、核质穿梭的可能机制及其基因沉默对细胞增殖影响等研究,初步阐明NYD-SP15基因的功能。方法:通过构建NYD-SP15原核表达质粒并诱导NYD-SP15蛋白在大肠杆菌中表达,根据测定的利福平突变频率分析其在体内的胞苷脱氨酶活性;通过构建NYD-SP15的绿色荧光融合蛋白慢病毒载体并感染MCF7细胞,分析其在不同细胞周期时的定位;通过抑制可特异识别NES序列并介导蛋白出核转运的CRM1蛋白,研究NYD-SP15可能的出核机制;通过构建NYD-SP15 RNA干扰慢病毒载体并感染MCF7细胞,并通过流式细胞仪检测细胞周期,研究NYD-SP15基因沉默对细胞周期的影响。结果:NYD-SP15在大肠杆菌中的诱导表达可使ung基因失活菌株BW310产生利福平抗性的频率升高5倍,但其诱导的DNA突变在大肠杆菌rpoB基因中并未显示出热点区域。NYD-SP15在MCF7细胞中的定位呈现3种形式:核中富集、胞浆富集和均匀分布,且3种形式细胞的比例在随细胞周期变化而变化,并在M期胞浆富集细胞比例达到最大值,同时均匀分布的细胞达到最小值。LMB处理后可见NYD-SP15在部分细胞中进一步富集于细胞核。将NYD-SP15在MCF7细胞中RNA干扰后,经流式细胞仪检测后发现干扰组的细胞周期阻滞于S期。结论:NYD-SP15在体内具备胞苷脱氨酶活性;在细胞中的定位具有核-质穿梭所用,且在M期主要定位于细胞质;同时NYD-SP15的这种出核转运可能与CRM1蛋白相关;RNA干扰后发现细胞阻滞于S期也提示我们NYD-SP15可能参与DNA的复制。目的:观察短时间低剂量氰戊菊酯(FEN)暴露对成年雄性ICR小鼠生殖系统及精子质量、活力、获能率的影响。方法:50只成年雄性ICR小鼠,随机分成5组,分别以0、0.009375、0.1875、3.75和45mg/kg剂量的FEN连续灌胃染毒30天后处死,分别测定小鼠体重和双侧睾丸重量;用计算机辅助精子分析(CASA)测定获能前后精子活力;用金霉素(CTC)染色测定获能率;对睾丸切片进行H&E染色观察组织形态学变化。结果:FEN染毒组与对照组相比,0.1875mg/kg组精子获能后运动路径笔直度(STR)与直线性(LIN)都有显著下降(P<0.05);0.009375、0.1875、3.750和45.00 mg/kg剂量组与对照组相比,精子获能率呈极显著的剂量-效应降低(P<0.01)。结论:低剂量FEN暴露30天可使成年小鼠精子质量及精子获能率下降。

全文目录

第一部分 NYD-SP15 生物学功能研究  5-39
  中文摘要  6-7
  Abstract  7-9
  引言  9-11
  材料和方法  11-20
  结果  20-30
  讨论  30-33
  结论  33-34
  参考文献  34-39
第二部分 FEN 对成年ICR 小鼠精子质量及获能率的影响  39-60
  中文摘要  40-41
  Abstract  41-42
  引言  42-44
  材料和方法  44-48
  结果  48-54
  讨论  54-56
  参考文献  56-60
文献综述  60-73
  参考文献  65-73
硕士研究生期间所发表文章  73-74
致谢  74

NYD-SP15生物学功能研究及FEN对成年ICR小鼠精子质量及获能率的影响

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