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家蚕ORC基因家族的研究

作　者: 杨慧鹏
导　师: 张耀洲；张志芳
学　校: 浙江理工大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 家蚕复制原点识别复合体克隆 RACE BmNPV 实时荧光定量PCR
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

DNA复制原点识别复合体(Origin recognition complex, ORC)是包含6个亚基的异源六聚体,最早在酿酒酵母分离得到,按分子量从大到小命名为Orclp-6p。几乎在所有真核生物中均有发现。ORC的功能就像一个着陆垫,识别并结合在DNA复制原点上,募集其他相关的复制因子组成复制前复合体(pre-replication complex, pre-RC)。ORC各个独立的亚基还具有非复制相关的功能,如Orclp介导转录沉默、ORC核心复合体(Orc2p-5p)能促进中枢神经树突发生、Orc6p与细胞分裂有关等。目前,在鳞翅目昆虫中,仅有云杉色卷蛾的Orc6p被克隆出来。本研究通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和生物信息学分析,获得了家蚕ORC全部六个亚基的cDNA序列和基因组序列。对预测的家蚕ORC的六个亚基的氨基酸序列进行了系统发生分析,发现家蚕ORC的各个亚基与源自酵母、脊索动物以及其他物种的对应亚基的相似性要高于各亚基之间的相似性。在胚胎发育过程中,家蚕ORC的六个亚基在mRNA水平上表现出协同的表达趋势,但是在家蚕5龄第6天的13个组织中,六个亚基的表达丰度存在一定的差异。家蚕感染核型多角体病毒(BmNPV)后,ORC各个亚基的表达量在早期有所下降,随后表达量增加。在病毒感染36小时后,ORC各个亚基的表达量均下降。根据相似性,家蚕ORC的六个亚基分别命名为BmORC1-6,其中BmORC1的5’端尚不完整。蛋白质保守结构域分析发现,BmOrclp-5p均含有的AAA+结构域,但是氨基酸序列的保守性差。BmOrc6p的羧基端含有一个较短的目前只在鳞翅目昆虫中发现的序列。系统发生分析中各个亚基与源自其他物种对应亚基的较高相似性表明BmORC的六个亚基在酵母、昆虫和脊索动物分化之前就已经起源并独自进化了。胚胎发育过程中相似的表达趋势表明BmORC的六个亚基作为一个功能复合体发挥功能。然而,在五龄第六天的十三个组织器官中各亚基的表达差异暗示各独立亚基可能具有非复制相关的功能。在病毒侵染实验中,BmORC的六个亚基相似的表达变化趋势,说明这六个亚基可能参与了家蚕核型多角体病毒DNA的复制过程。

家蚕ORC基因家族的研究

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