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RNAi转基因家蚕抑制BmNPV的抗性研究

作 者: 叶秋霞
导 师: 薛仁宇
学 校: 苏州大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 家蚕 BmNPV RNAi lef-1 ie-1 转基因 品种
分类号: Q78
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 34次
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内容摘要


已有研究表明利用RNAi技术通过干扰BmNPV复制的必需基因ie-1lef-1和gp64,可以有效抑制BmNPV的增殖。然而,由于选择干扰的靶基因不同,抑制病毒复制的效率相差甚远,即时对于同一个基因,针对不同区域的siRNA其效率也有很大差异。为了探讨表达不同dsRNA的转基因家蚕对BmNPV的抗性,将已构建的带有短lef-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo,通过精子介导法导入家蚕(皓月)体内,通过GFP荧光和G418抗性双重筛选,结合PCR、点杂交等分子生物学鉴定获得了转基因家蚕。对G6代2龄转基因家蚕接种BmNPV,结果显示转基因家蚕的死亡率比对照组下降了10%-30%,表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高;对接种BmNPV的5龄转基因家蚕的定量PCR检测结果显示转基因家蚕体内的lef-1 mRNA水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。同时,为了研究不同品系转基因家蚕对BmNPV的抗性,将带有长ie-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-IE-Neo通过精子介导法导入家蚕(菁松)体内,对G1代研究结果表明抑制BmNPV的增殖。另外,我们还对菁松、皓月、苏菊(A、B系)、明虎(A、B系)和高白×皓月的这五种品系的二龄起蚕进行攻毒实验,同时与上述两种转基因家蚕进行抗性比较。研究结果表明不同品种的家蚕对病毒的抗性存在差异,但是总体上转基因家蚕比其它品种对病毒的抗性都要高。进一步证明了通过转基因技术可以增强家蚕对病毒的抗性。

全文目录


中文摘要  4-5
Abstract  5-9
前言  9-11
第一部分 文献综述  11-38
  第一章 RNAi 的研究进展  11-25
    1 RNAi 研究的历史历程  11-12
    2 RNAi 的分子机制和生物学特性  12-17
    3 RNAi 的技术及其应用前景  17-22
    参考文献  22-25
  第二章 转基因家蚕的研究进展  25-34
    1 引言  25-26
    2 家蚕转基因技术方法  26-29
    3 转基因蚕研究中所采用的报告基因  29-31
    参考文献  31-34
  第三章 基于RNAi 抑制Bm NPV 增殖的研究进展  34-38
    1 引言  34
    2 家蚕抗BmNPV 育种的研究进展  34-36
    3 RNAi 抗病育种的前景  36
    参考文献  36-38
第二部分 正文  38-76
  第四章 研究目的与研究内容  38-40
    1 研究目的及意义  38-39
    2 研究内容  39
    3 主要研究技术路线  39-40
  第五章 实验材料与实验方法  40-48
    1 实验材料  40-42
    2 实验方法  42-47
    3 常用仪器  47-48
  第六章 表达短lef-1 dsRNA 转基因家蚕抑制BmNPV 增殖及遗传稳定性的研究  48-60
    1 材料与方法  50-52
    2 结果与分析  52-56
    3 讨论  56-58
    参考文献  58-60
  第七章 表达长ie-1 dsRNA 转基因家蚕抑制BmNPV 增殖的研究  60-69
    1 材料与方法  62-63
    2 结果与分析  63-66
    3 讨论  66-67
    参考文献  67-69
  第八章 属地不同品种家蚕的Bm NPV 抗性比较  69-76
    1 材料与方法  71
    2 结果与分析  71-73
    3 讨论  73-75
    参考文献  75-76
结论  76-77
  1 已取得的成果  76
  2 有待进一步研究的问题  76-77
攻读学位期间发表的论文  77-78
致谢  78-79

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程)
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