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RNAi转基因家蚕抑制BmNPV的抗性研究
作 者: 叶秋霞
导 师: 薛仁宇
学 校: 苏州大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 家蚕 BmNPV RNAi lef-1 ie-1 转基因 品种
分类号: Q78
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 34次
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内容摘要
已有研究表明利用RNAi技术通过干扰BmNPV复制的必需基因ie-1、lef-1和gp64,可以有效抑制BmNPV的增殖。然而,由于选择干扰的靶基因不同,抑制病毒复制的效率相差甚远,即时对于同一个基因,针对不同区域的siRNA其效率也有很大差异。为了探讨表达不同dsRNA的转基因家蚕对BmNPV的抗性,将已构建的带有短lef-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo,通过精子介导法导入家蚕(皓月)体内,通过GFP荧光和G418抗性双重筛选,结合PCR、点杂交等分子生物学鉴定获得了转基因家蚕。对G6代2龄转基因家蚕接种BmNPV,结果显示转基因家蚕的死亡率比对照组下降了10%-30%,表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高;对接种BmNPV的5龄转基因家蚕的定量PCR检测结果显示转基因家蚕体内的lef-1 mRNA水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。同时,为了研究不同品系转基因家蚕对BmNPV的抗性,将带有长ie-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-IE-Neo通过精子介导法导入家蚕(菁松)体内,对G1代研究结果表明抑制BmNPV的增殖。另外,我们还对菁松、皓月、苏菊(A、B系)、明虎(A、B系)和高白×皓月的这五种品系的二龄起蚕进行攻毒实验,同时与上述两种转基因家蚕进行抗性比较。研究结果表明不同品种的家蚕对病毒的抗性存在差异,但是总体上转基因家蚕比其它品种对病毒的抗性都要高。进一步证明了通过转基因技术可以增强家蚕对病毒的抗性。
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全文目录
中文摘要 4-5 Abstract 5-9 前言 9-11 第一部分 文献综述 11-38 第一章 RNAi 的研究进展 11-25 1 RNAi 研究的历史历程 11-12 2 RNAi 的分子机制和生物学特性 12-17 3 RNAi 的技术及其应用前景 17-22 参考文献 22-25 第二章 转基因家蚕的研究进展 25-34 1 引言 25-26 2 家蚕转基因技术方法 26-29 3 转基因蚕研究中所采用的报告基因 29-31 参考文献 31-34 第三章 基于RNAi 抑制Bm NPV 增殖的研究进展 34-38 1 引言 34 2 家蚕抗BmNPV 育种的研究进展 34-36 3 RNAi 抗病育种的前景 36 参考文献 36-38 第二部分 正文 38-76 第四章 研究目的与研究内容 38-40 1 研究目的及意义 38-39 2 研究内容 39 3 主要研究技术路线 39-40 第五章 实验材料与实验方法 40-48 1 实验材料 40-42 2 实验方法 42-47 3 常用仪器 47-48 第六章 表达短lef-1 dsRNA 转基因家蚕抑制BmNPV 增殖及遗传稳定性的研究 48-60 1 材料与方法 50-52 2 结果与分析 52-56 3 讨论 56-58 参考文献 58-60 第七章 表达长ie-1 dsRNA 转基因家蚕抑制BmNPV 增殖的研究 60-69 1 材料与方法 62-63 2 结果与分析 63-66 3 讨论 66-67 参考文献 67-69 第八章 属地不同品种家蚕的Bm NPV 抗性比较 69-76 1 材料与方法 71 2 结果与分析 71-73 3 讨论 73-75 参考文献 75-76 结论 76-77 1 已取得的成果 76 2 有待进一步研究的问题 76-77 攻读学位期间发表的论文 77-78 致谢 78-79
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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程)
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