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黄芪总黄酮对正常细胞和肝癌细胞的辐射防护差异性研究

作　者: 胥正敏
导　师: 鄢佳程
学　校: 川北医学院
专　业: 药理学
关键词: 黄芪总黄酮放射骨髓间充质细胞肝癌细胞凋亡
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：本实验以川产膜夹黄芪(Astragalus)为原料,以乙酸乙酯改良萃取技术分离提取黄芪总黄酮(Total Flavonoids of Astragalus TFA),主要研究TFA对放射损伤人正常骨髓间充质细胞(human mesenchymal stem cells hMSCs)和人肝癌细胞HepG-2的不同放射防护效应；从DNA和蛋白水平上深入探讨TFA对正常细胞和肿瘤细胞放射防护作用差异性的分子机理。方法：以肝癌细胞HepG-2和人体正常细胞hMSCs为实验对象,设置空白对照组(不照射,不给药),单纯照射组(只照射,不给药)TFA用药照射组(TFA处理+照射)三个实验组；当细胞生长至对数生长期时,给予照射剂量为6Gy的60Coγ射线一次性照射。MTT法检测不同浓度TFA处理组与未处理组hMSCs和HepG-2经60Coγ射线照射后细胞的存活率；流式细胞技术分析照射后6h、24h、48h各实验组细胞的凋亡率；琼脂糖电泳技术分析照射后24h和72h各实验组细胞DNALadder的形成；Western blot方法分析照射后24h和72h各实验组HepG-2细胞凋亡相关蛋白Fas, Bcl-2, Bax的表达。结果：MTT检测结果显示在照射后24h,经0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.15mg/ml、0.20mg/ml不同浓度TFA预处理的hMSCs,其细胞存活率分别是单纯照射组的1.15、1.38、1.80、1.95倍；与此相反,经相同浓度TFA预处理的肝癌细胞HepG-2,其细胞存活率分别只有单纯照射组的0.53、0.51、0.41、0.23倍；说明TFA对人体正常细胞具有良好的放射防护作用,对肿瘤细胞具有显著的放射增敏效应,并呈现出良好的剂量依赖性。琼脂糖电泳结果显示,TFA对正常细胞和肿瘤细胞核DNALadder形成具有不同的影响。TFA用药照射组hMSCs核DNA形成的DNA Ladder明显低于单纯照射组；而TFA用药照射组HepG-2核DNA形成的DNA Ladder明显高于单纯照射组。流式细胞分析显示,经60Coγ射线照射6h、24h、48h后,单纯照射组hMSCs的凋亡率分别为29.3%、24.9%、13.6%,TFA用药照射组hMSCs的凋亡率分别为23.3%、11.2%、2.9%；单纯照射组HepG-2的凋亡率分别为6.9%、9.3%、15.8%；TFA用药照射组HepG-2的凋亡率分别为11.6%、17.3%、20.1%。结果提示,TFA预处理能够降低60Coγ射线对正常细胞的凋亡诱导,促进60Coγ射线对肿瘤细胞的凋亡诱导,说明TFA对细胞凋亡具有双重调节作用。Western blot结果显示,在肝癌细胞HepG-2中,单纯照射组Fas蛋白表达较弱与空白对照组Fas表达量相似；TFA用药照射组Fas表达量明显高于单纯照射组和空白对照组。各组细胞Bax的表达与Fas表达基本一致,Bcl-2的表达刚好与Bax和Fas的表达相反。结论：TFA对人正常骨髓间充质细胞具有明显的放射防护作用,对肝癌细胞不仅没有放射防护作用反而具有促凋亡作用,TFA通过调控凋亡相关蛋白表达从而增强γ射线对肝癌细胞的杀伤作用。

黄芪总黄酮对正常细胞和肝癌细胞的辐射防护差异性研究

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