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血管生成调节因子对性成熟小鼠卵泡及其血管发育的影响

作　者: 张郡
导　师: 刘红林
学　校: 南京农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 卵泡 血管 凋亡 血管生成调节因子 颗粒细胞
分类号: S852.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


小的腔前卵泡没有血管供给其发育,有腔卵泡在他们的鞘膜有血管网,这些血管不会渗透到卵泡膜里,但是在卵泡生长中会逐渐延展。当卵泡的微血管系统形成之后,优势卵泡的生长会通过一个更高级的毛细血管网来提供其营养。卵泡血管的发育开始于卵泡发育的早期,在鞘膜的血管会随着卵泡的发育数量和大小上会增加,这些表明在卵泡和血管发育之间存在着很重要的联系。探讨血管发育影响因子血管内皮生长因子(VEGF-120)、促卵泡激素(FSH)、2-甲氧基雌二醇(2-ME2)、4-羟基雌二醇(4-OHE2)、FSHR antagonist (FSH受体拮抗剂)对卵泡生成的影响。将小鼠分为实验组和对照组(各5只)。对照组腹腔注射PBS,实验组分别腹腔注射不同药品；一段时间以后固定一侧卵巢,连续切片,HE染色统计分析卵巢中不同大小卵泡数量的变化以及卵泡周围血管发育情况；另一侧卵巢提取颗粒细胞总RNA,定量分析VEGF、F1k-1表达含量的变化。研究结果如下：(1)性成熟小鼠注射FSH和VEGF后小鼠卵巢重量显著增加,其它实验组对卵巢重量作用差异不显著；2-ME2可能削弱了FSH促卵泡发育的作用,VEGF这种促进作用可被FSHR antagonist削弱。(2)各种处理对大、中、小卵泡数量具有不同影响。FSH和VEGF可以使大卵泡数显著上升；对于中型卵泡VEGF相对于实验组显著上升,注射VEGF+FSHR antagonist和2-ME2+FSH后中卵泡数目明显下降；注射药品VEGF后小卵泡数下降,其他实验组相对于对照组差异不显著。(3)各种处理对大、中、小卵泡闭锁率具有不同影响。注射药品2-ME2和4-OHE2后大卵泡闭锁率相对于对照组显著上升,注射药品FSH、2-ME+FSH后大卵泡闭锁率相对于对照组显著下降；注射药品4-OHE2和VEGF+FSHR antagonist后中卵泡闭锁率上升；注射VEGF后小卵泡闭锁率上升,其它实验组作用不明显。(4)各种处理对卵泡基膜中的血管发育具有不同影响。注射FSH、VEGF和VEGF+FSH antagonist后大卵泡周围的红细胞数相对于对照组显著上升,注射2-ME2、4-OHE2、2-ME2+FSH后大卵泡周围的红细胞数相对于对照组显著下降；注射药品FSH和VEGF后中卵泡周围红细胞数目上升,注射药品2-ME2和2-ME2+FSH后中卵泡周围红细胞数目明显下降；注射药品2-ME2和2-ME2+FSH后小卵泡周围红细胞数目减少,其它实验组作用不明显。(5)注射VEGF后小鼠颗粒细胞中VEGF基因表达含量明显上升,注射4-OH2后VEGF表达含量显著下降,其它实验组作用不明显；注射FSH和VEGF组小鼠颗粒细胞F1k-1表达含量明显上升。

全文目录


摘要  6-8ABSTRACT  8-10缩略语的中英文对照  10-11引言  11-12第一部分 文献综述  12-34  第一章 小鼠卵泡发育  12-20    1 卵子的发生  12    2 卵泡的发育  12-20      2.1 卵泡发育形态变化  12-14      2.2 卵泡大概发育的时期  14-15      2.3 小鼠卵泡分类  15      2.4 发情各期不同直径卵泡数目  15-16      2.5 卵泡发育机制  16-20  第二章 卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡机制  20-26    1 细胞凋亡研究进展  20-21    2 哺乳动物卵巢卵泡闭锁  21-26      2.1 与颗粒细胞凋亡有关的激素  21-23      2.2 与颗粒细胞凋亡相关的细胞因子  23      2.3 与颗粒细胞凋亡相关的基因  23-25      2.4 闭锁的调控因素  25-26  第三章 卵母细胞周围血管及其影响因子的研究  26-34    1 VEGF的研究进展  26-28      1.1 VEGF与卵巢血管生成和重塑  26-27      1.2 VEGF及其受体  27-28    2 FSH与FSHR研究进展  28-31      2.1 FSH研究进展  28-30      2.2 FSHR研究进展  30-31    3 2-ME2研究进展  31-34      3.1 细胞周期阻滞  31-32      3.2 2-ME2促凋亡作用  32      3.3 2-ME2抗血管生成作用  32-34第二部分 实验部分  34-60  第四章 试验设计  34-60    1 材料与方法  34-35      1.1 实验动物  34      1.2 主要试剂和器械  34-35      1.3 试剂配制及用量  35    2 实验方法  35-41      2.1 动物分组及注射方法  35-36      2.2 卵巢处理  36      2.3 石蜡包埋步骤  36-37      2.4 HE染色步骤  37      2.5 发情鉴定  37-39      2.6 卵泡及血管统计  39      2.7 颗粒细胞总RNA的提取和cDNA的合成  39-40      2.8 引物设计和荧光实时定量PCR  40-41      2.9 统计学处理  41    3 实验结果  41-56      3.1 小鼠卵泡发育情况  41-46      3.2 各种处理对小鼠卵泡闭锁的影响  46-50      3.3 墨水注射法和红细胞分布情况对比  50-54      3.4 VEGF和FLK-1在颗粒细胞中表达情况  54-56    4 讨论  56-60全文结论  60-62参考文献  62-68附录  68-70致谢  70

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜生理学、生物物理学、生物化学
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