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大鼠同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗急性肝衰竭的实验研究

作　者: 杨玲玲
导　师: 何金秋
学　校: 南昌大学
专　业: 内科学
关键词: 急性肝衰竭骨髓间充质细胞实验研究
分类号: R575.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究目的：观察骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)移植对经CCL4诱导的急性肝衰竭大鼠的疗效。实验方法：1.BMSCs的分离、培养及鉴定无菌条件下分离大鼠股骨骨髓,采用全骨髓贴壁筛选法培养并纯化其BMSCs,经免疫细胞化学法及流式细胞仪法检测其是否表达免疫表型CD29、CD44及CD34、CD45。2.BMSCs移植疗效观察30只健康SD大鼠随机均分为3组：正常对照组、肝衰竭组和移植组。正常对照组不予任何处理,肝衰竭组和移植组均给予一次性腹腔注射50%四氯化碳石蜡油溶液(12 mL/kg)以建立急性肝衰竭模型,然后分别经鼠尾静脉注射生理盐水和等量骨髓间充质干细胞。最后观察三组大鼠存活率、肝功能及肝脏组织病理变化情况。结果：1.免疫细胞化学染色法检测显示,P3代BMSCs CD29, CD44表达阳性,CD34. CD45表达阴性,阳性细胞表现为细胞膜呈棕色或棕褐色；流式细胞仪检测结果显示P3代BMSCs CD29、CD44高表达,阳性率分别为99.3%,99.6%；CD34、CD45低表达,阳性率分别为4.3%,17.1%。2.大鼠存活率结果显示,CCL,所致肝衰竭鼠1周存活率为20%,BMSCs移植组生存率为70%,肝功能指标中ALT和AST相比,移植组明显低于肝衰竭组；肝脏组织病理学结果显示移植组肝细胞变性、坏死程度以及炎症细胞浸润程度明显轻于肝衰竭组。结论：1.利用全骨髓贴壁筛选法培养可获得纯度高、细胞形态均一BMSCs。2. BMSCs移植能显著改善急性肝衰竭大鼠肝功能、减轻肝脏坏死程度及提高其生存率。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
前言  10-16
  参考文献  13-16
第一部分骨髓间充质干细胞采集、分离、培养及鉴定  16-30
  引言  16
  材料与方法  16-21
    1 实验材料  16-18
      1.1 实验动物  16
      1.2 实验试剂  16-17
      1.3 实验仪器  17-18
      1.4 主要试剂的配制  18
    2 实验方法  18-21
      2.1 细胞采集  18-19
      2.2 细胞分离及培养  19
      2.3 细胞换液、消化及传代  19-20
      2.4 细胞鉴定  20-21
  结果  21-26
    3.1 BMSCs的形态学特点  21-23
    3.2 P3代BMSCs细胞爬片  23
    3.3 免疫细胞化学染色  23-25
    3.4 流式细胞仪检测BMSCs表面标志物的表达  25-26
  讨论  26-28
  参考文献  28-30
第二部分骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭实验观察  30-42
  引言  30
  材料与方法  30-32
    1 实验材料  30-31
      1.1 实验动物  30
      1.2 实验试剂  30-31
      1.3 试剂配制  31
    2 实验方法  31-32
      2.1 建立急性肝衰竭动物模型  31
      2.2 动物分组与移植治疗  31
      2.3 观察指标  31-32
      2.4 统计学分析  32
  结果  32-37
    3.1 大鼠的一般生存情况  32
    3.2 大鼠的生存率  32-33
    3.3 大鼠肝功能检测  33-35
    3.4 肝脏组织病理特点  35-37
  讨论  37-39
  参考文献  39-42
结论与展望  42-43
致谢  43-44
附图  44-46
攻读学位期间的研究成果  46-47
综述  47-54
  参考文献  52-54

大鼠同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗急性肝衰竭的实验研究

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