学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

瑞士乳杆菌S-层蛋白基因的克隆与表达

作　者: 杨秀华
导　师: 李宗军
学　校: 湖南农业大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: S-层蛋白 乳酸菌 黏附 克隆 表达 纯化
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 59次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


乳酸菌在自然界分布广泛,特别是在碳水化合物和蛋白质丰富的地方如植物和发酵食品,属G+菌,以发酵糖类生成乳酸为主要特点或以乳酸为主要终产物。而且,乳酸菌还是人和动物肠道及泌尿生殖道的正常菌群。如嗜酸乳杆菌,短乳杆菌及瑞士乳杆菌等。瑞士乳杆菌是同型发酵嗜热乳酸菌,常用于瑞士产及意大利长成熟期型乳酪,比如瑞士多孔奶酪,格拉那奶酪,及普罗卧干酪奶酪等。而且瑞士乳杆菌是应用最普遍的自然发酵剂。S-层蛋白(surface layer protein, slp)是一些细菌及古细菌细胞壁表面所包被的生物活性大分子。这种蛋白能够形成周期性的有序结构,如倾斜形,正方形或是匀称的六边形。最新研究表明,这些结构是通过非共价键相互作用,在熵驱动下自我组装而成。鉴于其高度周期有序的多孔超微结果,使S-层蛋白在生物技术、纳米技术、生物医学等方面都具有多种应用前景。对于S-层蛋白的功能还不是很清楚,目前认为它具有保护菌体避开不利环境,维持细胞形状及黏附功能。许多乳酸菌能够黏附到小肠上皮细胞,Caco-2细胞,黏液,DC (dendritic cell)及胞外基质(extracellular matrix)等。此外经提取的S-层蛋白还能够抑制肠出血性大肠埃希菌与宿主上皮细胞的黏附作用。在本研究中,通过PCR获得了瑞士乳杆S-层蛋白的基因,并表达于大肠杆菌JM109中,为将来开展进一步研究打下了基础,得到了以下主要研究结果。1以瑞士乳杆菌ATCC 15009 S-层蛋白基因为模板,利用primier5.0设计引物,通过PCR得到瑞士乳杆菌S-层蛋白基因。2成功将瑞士乳杆菌S-层蛋白基因表达于E.coli JM109中,而且在20℃,0.6 mM IPTG,150rpm条件下诱导过夜,蛋白表达量较大,经Ni-NTA纯化,得到了较纯的蛋白,可以用于下一步的研究。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章 文献综述  8-21
  1 S-层蛋白结构特点  8-9
  2 乳酸菌S-层蛋白  9-15
    2.1 乳酸菌S-层蛋白结构特点  9-10
    2.2 乳酸菌S-层蛋白功能  10-11
    2.3 乳酸菌S-层蛋白与宿主间的黏附机制  11
    2.4 影响乳酸菌S-层蛋白黏附因素  11-12
    2.5 S-层蛋白与细胞壁间的黏附  12
    2.6 乳酸菌S-层蛋白的多样性  12-15
  3 乳酸菌S-层蛋白的研究方法  15-16
    3.1 超微结构研究技术  15
    3.2 黏附作用研究技术  15-16
    3.3 基于S-层蛋白的表面展示技术  16
  4 乳酸菌S-层蛋白应用举例  16-20
    4.1 S-层蛋白与免疫学  16-19
    4.2 S-层蛋白与微生态制剂  19-20
  5 乳酸菌S-层蛋白基因克隆与表达研究进展  20-21
第二章 瑞士乳杆菌S-层蛋白基因的克隆  21-28
  引言  21
  1 材料与方法  21-24
    1.1 材料与设备  21-23
      1.1.1 材料  21
      1.1.2 主要药品与试剂  21-22
      1.1.3 主要仪器设备  22-23
    1.2 方法  23-24
      1.2.1 从瑞士乳杆菌中制备基因组DNA  23
      1.2.2 引物设计  23
      1.2.3 PCR扩增S-层蛋白基因片段  23-24
      1.2.4 基因序列测定  24
  2 结果与分析  24-26
    2.1 引物设计  24
    2.2 PCR反应体系优化  24
    2.3 PCR结果  24-25
    2.4 PCR产物测序  25-26
  3 讨论  26-27
  4 小结  27-28
第三章 瑞士乳杆菌S-层蛋白基因的表达  28-38
  引言  28
  1 材料与方法  28-35
    1.1 材料与设备  28-29
      1.1.1 材料  28
      1.1.2 主要药品与试剂  28-29
      1.1.3 主要仪器设备  29
    1.2 方法  29-33
      1.2.1 PCR产物与原核表达载体pQE30的连接  29-33
    1.3 转化子的检测  33
    1.4 S-层蛋白基因诱导表达及蛋白检测  33-35
  2 结果与分析  35-37
    2.1 基因片段与T载体连接  35
    2.2 pQE30与外源片段连接  35-36
    2.3 诱导表达  36-37
  3 讨论  37
  4 小结  37-38
第四章 表达瑞士乳杆菌S-层蛋白的纯化  38-42
  引言  38
  1 材料与方法  38-40
    1.1 材料与设备  38-39
      1.1.1 材料  38
      1.1.2 主要药品与试剂  38
      1.1.3 主要仪器设备  38-39
    1.2 方法  39-40
      1.2.1 在变性条件下制备大肠杆菌裂解液  39-40
      1.2.2 SDS-PAGE分析  40
  2 结果与分析  40-41
  3 讨论  41
  4 小结  41-42
本文主要结论  42-43
创新点与展望  43-44
参考文献  44-52
致谢  52-53
作者简介  53-54
附件1  54-58

相似论文

  1. 多转录因子组合调控研究,Q78
  2. 苹果多酚对γ射线引起的免疫系统损伤防护作用研究,S661.1
  3. 高校艺术教学建筑设计研究,TU244.3
  4. 时间表达式识别与归一化研究,TP391.1
  5. 拟南芥胱硫醚-γ-合成酶（D-AtCGS）基因在大肠杆菌中的表达及抗血清制备,Q943.2
  6. 红肉脐橙和‘国庆四号’温州蜜柑中CHS和CHI基因的克隆与表达及其对类黄酮积累的调控机制,S666.4
  7. 拟南芥热激因子HSFA1d响应甲醛胁迫的作用研究,Q945.78
  8. hBMP4和hBMP7在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究,Q78
  9. 扩展青霉TS414脂肪酶在毕赤酵母的表达、纯化及其催化外消旋萘普生酯化拆分的研究,Q814
  10. 南极冰藻GPx、GST和SAHH基因的克隆、定量分析及原核表达载体的构建,Q943.2
  11. 米曲霉FS-1脂肪酶发酵优化、分离纯化与酶学特性的研究,TQ925.6
  12. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  13. 金花茶多糖的分离纯化及化学结构的研究,S567.19
  14. 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
  15. 草鱼呼肠孤病毒vp6和ns38基因的克隆、表达及VP6和NS38免疫原性研究,S941.41
  16. 翡翠贻贝糖胺聚糖降血脂作用的研究,R285.5
  17. Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
  18. BMP通路关键因子在人类牙胚组织中的表达检测,R78
  19. 《庄子》修辞策略探析,B223.5
  20. Gsα的过表达和缺失对果蝇大脑发育的影响,Q75
  21. 基于RNA测序技术的马氏珠母贝珍珠囊转录组及数字基因表达谱分析,Q786

中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程）
© 2012 www.xueweilunwen.com