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左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究

作　者: 郑轶峰
导　师: 张力华
学　校: 成都中医药大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 骨髓抑制 左归丸 右归丸 凋亡 细胞周期
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的：肿瘤患者放、化疗所引起的骨髓抑制,严重影响病人的治疗和预后。左归丸滋补肾阴,右归丸温补肾阳,均出自明代名家张景岳的《景岳全书》,为补肾经典方剂。为了给左归丸和右归丸的临床应用和开发提供实验室依据,本研究全面地观察了左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,并探讨其调控机理；对放、化疗所致骨髓抑制从肾论治的阴阳辨证关系进行分析,试图求证,肿瘤患者放、化疗骨髓抑制所致的虚症,主要是肾阴虚还是肾阳虚。方法：本试验用60Co-Y射线照射加环磷酰胺复合法制备骨髓抑制小鼠模型,应用外血细胞和骨髓细胞计数、骨髓切片形态学观察、造血祖细胞培养、流式细胞术、免疫组织化学等技术,从造血效应、造血干／祖细胞的增殖能力、细胞周期和细胞凋亡及其调控、凋亡相关蛋白表达等多方面,研究左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠造血功能的作用及其机制。结果：在一定剂量范围内：1.左归丸和右归丸均能提高骨髓抑制小鼠外周血红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板和骨髓有核细胞数,促进骨髓显微组织结构损伤的恢复,增加造血面积,提高骨髓抑制小鼠BFU-E、CFU-E、CFU-GM、CFU-Meg集落数。2.左归丸和右归丸均可使骨髓抑制小鼠骨髓G0／G1期细胞比例减少,S期和G2／M期的细胞比例增加,增殖指数增加。两方均可降低骨髓抑制小鼠骨髓细胞的凋亡比例,显著促进Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达。3.两中药方剂相比,左归丸骨髓细胞凋亡比例显著低于右归丸,其余指标两方剂之间无统计学差异。结论：1.左归丸和右归丸均能确切有效地促进放、化疗骨髓抑制小鼠造血功能的恢复,对外周血白细胞、红细胞和血小板都有一定的作用。两方剂均可通过加快骨髓细胞进入细胞周期,解除细胞周期阻滞,来促进造血细胞增殖；促进Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,进而抑制细胞凋亡,可能也是两方促进放、化疗骨髓抑制小鼠造血功能恢复的作用机制之一。2.两丸剂对比,左归丸对骨髓细胞的抗凋亡能力可能强于右归丸,但总体造血效能没有显著差异。结论提示：放、化疗骨髓抑制模型小鼠表现出来的“虚劳”,可能没有明确的阴阳偏属,通过补肾来治疗肿瘤患者放、化疗所致的骨髓抑制时,应具体地辨证施治。

全文目录


前言  3-4
中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
目录  8-10
缩略词表  10-12
第一部分 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠造血功能的影响  12-25
  1 实验材料  12-14
    1.1 实验动物  12
    1.2 实验材料和试剂  12-13
    1.3 主要仪器与设备  13-14
  2 实验方法  14-16
    2.1 骨髓抑制小鼠模型的建立  14
    2.2 动物分组与给药  14
    2.3 小鼠体重变化和脾脏、胸腺指数检测  14-15
    2.4 外周血细胞计数  15
    2.5 骨髓有核细胞悬液的制备  15
    2.6 骨髓及脾脏组织学观察  15
    2.7 造血祖细胞的培养  15-16
  3 统计学方法  16
  4 结果  16-20
    4.1 小鼠的一般状况  16
    4.2 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠体重、脾指数和胸腺指数的影响  16-18
    4.3 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠外周血象的影响  18
    4.4 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠骨髓组织结构和骨髓有核细胞计数的影响  18
    4.5 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠脾脏组织结构的影响  18-19
    4.6 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠造血祖细胞培养的影响  19-20
  5 讨论  20-25
第二部分 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠造血调控作用机制的研究  25-37
  1 实验材料  25-26
    1.1 实验动物  25
    1.2 实验材料和试剂  25-26
    1.3 主要设备  26
  2 实验方法  26-28
    2.1 骨髓抑制小鼠模型的建立  26
    2.2 动物分组与给药  26
    2.3 细胞周期和凋亡比例的测定  26-27
    2.4 骨髓组织切片的制备  27
    2.5 凋亡相关蛋白表达的检测  27-28
    2.6 图像分析方法  28
  3 统计学方法  28
  4 结果  28-31
    4.1 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期的影响  28-30
    4.2 左归丸和右归丸对骨髓抑制小鼠骨髓细胞凋亡,以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响  30-31
  5 讨论  31-37
结论  37-38
问题与展望  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-45
附件1:综述 中药治疗放化疗所致骨髓抑制的实验研究进展  45-52
  参考文献  49-52
附件2:发表论文  52-53
附图  53-59

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