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炎症对C57BL/6J小鼠肝脏胆固醇积聚及纤维化的影响

作　者: 刘宇
导　师: 左国庆
学　校: 重庆医科大学
专　业: 内科学
关键词: C57BL/6J小鼠肝脏酪蛋白炎症胆固醇内质网应激肝纤维化
分类号: R575.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

第一部分建立肝脏慢性炎症模型目的：通过向C57BL/6J小鼠皮下注射10%酪蛋白（Casein），在小鼠体内，诱导发生系统性、低封度、慢性炎症，比较炎症在小鼠肝脏内对胆固醇蓄积、内质网应激及纤维化的影响。方法：选取8周龄雄性C57BL/6J小鼠共24只，随机分组为：对照组（n=6，N）、炎症刺激组（n=6，NC）、高胆固醇饮食组（n=6，H）和高胆固醇饮食+炎症刺激组（n=6，HC）。10%酪蛋白0.5ml向炎症组小鼠隔日皮下注射，同时，等量生理盐水向非炎症组小鼠注射。其中高胆固醇饮食组和高胆固醇饮食+炎症刺激组喂养高胆固醇饲料，主要为1.25%胆固醇、0.5%胆酸和15%脂肪，N组和NC组进行喂养普通饲料。14周后处死小鼠，收集血清和肝脏组织样本，采用ELISA法及RT-PCR法测定血清及肝脏组织中炎症因子水平。结果：与非炎症组相比，予以炎症刺激的两组小鼠血清中白介素-6（IL-6）和血清淀粉样蛋白（SAA）浓度水平显著升高，肝脏组织中单核细胞趋化蛋白（MCP）1和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的mRNA表达水平也明显增高，差异均有统计学意义。结论：向C57BL/6J小鼠隔天皮下注射10%酪蛋白14周，能在体内诱导小鼠发生慢性炎症，成功制造小鼠慢性炎症模型。第二部分炎症对小鼠肝脏胆固醇积聚的影响目的：通过C57BL/6J小鼠炎症模型，研究炎症对小鼠血清及肝组织脂质的水平、胆固醇代谢相关基因mRNA水平影响。方法：通过油红O染色观察肝组织脂质沉积,通过酶法测定小鼠血清中总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平，通过化学酶促-比色法测定小鼠肝组织中总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）、胆固醇酯（CE）的含量。通过实时定量PCR检测肝脏胆固醇代谢相关基因mRNA水平。结果：肝组织油红O染色结果显示，炎症组红染颗粒较非炎症组增多，其中以HC组增多最为明显。血清胆固醇检测结果提示，高胆固醇饮食可以增加血清中TC、LDL、HDL浓度，但炎症能降低其在血清中的浓度。肝组织胆固醇测定结果提示，NC、H、HC三组TC、FC、CE含量均较N组有所增加，且以HC组最为显著（P<0.05）。PCR结果提示，炎症刺激下肝脏胆固醇代谢相关基因mRNA水平均明显增高，其中以HC组增高最为显著。结论：说明炎症可以通过影响胆固醇的摄入和合成导致肝脏胆固醇异常积聚。同时，由于炎症促进小鼠的胆固醇从血液向肝脏异常积聚而致血液中胆固醇水平相对减低。第三部分炎症对小鼠内质网应激及肝纤维化的影响目的：通过C57BL/6J小鼠炎症模型，研究炎症对小鼠内质网应激及肝纤维化的影响。方法：通过天狼猩红和Masson三色染色观察肝形态改变以及纤维化程度，通过免疫组化检测肝纤维化相关蛋白。通过实时定量PCR检测小鼠内质网应激及肝纤维化相关基因mRNA水平。结果：肝组织天狼猩红和Masson三色染色结果显示，NC、H、HC三组纤维化程度均较N组增多，其中以HC组最为明显。PCR结果提示，与N组相比，炎症刺激下内质网应激及促肝纤维化相关基因mRNA水平均明显增高，其中以HC组增高最为显著；而抗纤维化相关基因的合成减少，其中以HC组减少最为明显。免疫组化结果显示肝纤维化相关蛋白表达情况与基因相符。结论：说明炎症导致的肝脏胆固醇积聚与内质网应激有明显的相关性。炎症可以通过增加促纤维化因子和抑制抗纤维化因子表达，从而促进肝纤维化发生和发展。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-10
ABSTRACT  10-14
前言  14-15
第一部分建立肝脏慢性炎症模型  15-22
  1 材料与方法  15-19
  2 实验结果  19-20
  3 讨论  20-22
第二部分炎症对小鼠肝脏胆固醇积聚的影响  22-30
  1 材料与方法  22-26
  2 实验结果  26-28
  3 讨论  28-30
第三部分炎症对小鼠内质网应激及肝纤维化的影响  30-38
  1 材料与方法  30-33
  2 实验结果  33-36
  3 讨论  36-38
全文总结  38-39
参考文献  39-41
文献综述  41-47
  参考文献  45-47
致谢  47-48
攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文  48-49

炎症对C57BL/6J小鼠肝脏胆固醇积聚及纤维化的影响

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